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1030021-93-2,六肽Ac-Tyr(PO3H2)-Ala-Ala-Ala-Thr-Gly,Ac-Tyr(PO3H2)-Ala-Ala-Ala-Thr-Gly-COOH,Ac-pTyr-AAATG-OH,杭州专肽生物的产品

六肽Ac-Tyr(PO3H2)-Ala-Ala-Ala-Thr-Gly

编号:174996

CAS号:1030021-93-2

单字母:Ac-pTyr-AAATG-OH

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  • 编号:174996
    中文名称:六肽Ac-Tyr(PO3H2)-Ala-Ala-Ala-Thr-Gly
    CAS号:1030021-93-2
    单字母:Ac-pTyr-AAATG-OH
    三字母:Ac

    N端乙酰化封端

    -Tyr(PO3H2)

    磷酸化酪氨酸

    -Ala

    丙氨酸

    -Ala

    丙氨酸

    -Ala

    丙氨酸

    -Thr

    苏氨酸

    -Gly

    甘氨酸

    -OH

    C端羧基

    氨基酸个数:6
    分子式:C26H39O13N6P1
    平均分子量:674.59
    精确分子量:674.23
    等电点(PI):-
    pH=7.0时的净电荷数:-
    平均亲水性:-0.475
    疏水性值:0.86
    外观与性状:白色粉末状固体
    消光系数:1490
    来源:人工化学合成,仅限科学研究使用,不得用于人体。
    纯度:95%、98%
    盐体系:可选TFA、HAc、HCl或其它
    储存条件:负80℃至负20℃
    标签:磷酸化修饰肽   

  • 磷酸肽
    在生命过程中发挥重要作用,磷酸化的位置在多肽上的Tyr、Ser,Thr,。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸,目前使用的都是单苄基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的连接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法,但是目前采用该方法合成磷酸化多肽也有缺点,特别是在合成多磷酸化多肽或氨基酸较长的多肽的时候,连接效率低,最后产品纯度很低,对于这种磷酸化多肽,我们考虑采用后磷酸化方法,其合成过程就是在多肽合成结束后,选择性脱去要标记的氨基酸的侧链保护基,对于Tyr,Thr可以直接使用侧链不保护的氨基酸进行反应,而Ser可以采用Fmoc-Ser(trt),在1% TFA/DCM条件下可以定量的脱除。
           后磷酸化,采用双苄基亚磷酰胺,四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体,连接到羟基上,随后在过氧酸下氧化生成磷酰基,完成反应。

     

    目前,多肽的磷酸化修饰方法主要有两种:

    (1)将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中;

    (2)多肽序列在树脂上合成完后,再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化。
     

    1)将适当保护的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中:

    即事先将需要磷酸化的氨基酸(Thr,Ser或Tyr)磷酸化并适当保护,然后按照正常SPPS 合成流程将磷酸化单体缩合到多肽指定位点。这种方法操作简便,已经成为多肽单位点 磷酸化修饰的主要方法。



     

    2)多肽序列在树脂上合成完后,再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化:

            采用将磷酸化单体缩合到多肽中的方法进行磷酸化修饰时,磷酸化的氨基酸由于侧链修 饰的较大基团产生的位阻而导致难以与肽链缩合,并且之后的氨基酸引入都会比较困难, 尤其在含有多个磷酸化位点修饰时,合成将变得异常困难,并且最终产物成分复杂,难 以分离,产率极低。
            因此,当肽链中多个位点进行磷酸化时,可以考虑采用将多肽序列 在树脂上合成完后,再对其中的Ser、Tyr或Thr的侧链羟基进行磷酸化:其合成过程主要 就是在多肽合成结束之后,选择性的脱去要标记氨基酸的侧链保护基,对于Tyr,Thr可 以直接使用侧链不保护的氨基酸进行反应。

            侧链保护基在1%TFA/DCM条件下可以定量的脱 除。采用这种方法时,可以采用双苄基亚磷酰胺,四氮唑生成亚磷酰胺四唑活性中间体, 连接到羟基上,然后在过氧酸条件下氧化生成磷酰基,完成反应。

  • 多肽Ac-Tyr(PO3H2)-Ala-Ala-Ala-Thr-Gly-COOH的合成步骤:

    1、合成CTC树脂:称取0.14g CTC Resin(如初始取代度约为0.42mmol/g)和0.07mmol Fmoc-Gly-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入0.18mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到  Fmoc-Gly-CTC Resin。结构图如下:

    2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Gly-CTC Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:

    3、缩合:取0.18mmol Fmoc-Thr(tBu)-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入0.35mmol DIPEA,0.17mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:

    4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到

    H2N-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    H2N-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    H2N-Ala-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Ala-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    H2N-Ala-Ala-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    Fmoc-Tyr(HPO3Bzl)-Ala-Ala-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin

    以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。

    最后再经过步骤二得到 H2N-Tyr(HPO3Bzl)-Ala-Ala-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTC Resin,结构如下:

    5、乙酸酐反应连接:在上述树脂中,加入适当DMF后,再加入0.18mmol乙酸酐到树脂中,再加入0.35mmol DIPEA,鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。 得到Ac-Tyr(HPO3Bzl)-Ala-Ala-Ala-Thr(tBu)-Gly-CTCResin。 结构如下:

    6、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品Ac-Tyr(PO3H2)-Ala-Ala-Ala-Thr-Gly-COOH。结构图见产品结构图。

    切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%

    2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%

    3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%

    (前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)

    6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

    7、最后总结:

    杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽

    以上所有内容,为专肽生物原创内容,请勿发布到其他网站上。

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