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147217-25-2,Myr-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-GLN,Myristicacid-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-COOH,Myristicacid-FARKGALRQ-OH,杭州专肽生物的产品

Myr-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-GLN

肉豆蔻酰化九肽 Myr-FARKGALRQ 对应于 PKC-α 和 -β 亚型的假底物结构域,代表完整细胞中 PKC 的选择性和细胞渗透性抑制剂。

编号:163884

CAS号:147217-25-2

单字母:Myristicacid-FARKGALRQ-OH

纠错
  • 编号:163884
    中文名称:Myr-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-GLN
    CAS号:147217-25-2
    单字母:Myristicacid-FARKGALRQ-OH
    三字母:Myristicacid

    N端肉豆蔻酸修饰

    -Phe

    苯丙氨酸

    -Ala

    丙氨酸

    -Arg

    精氨酸

    -Lys

    赖氨酸

    -Gly

    甘氨酸

    -Ala

    丙氨酸

    -Leu

    亮氨酸

    -Arg

    精氨酸

    -Gln

    谷氨酰胺

    -OH

    C端羧基

    氨基酸个数:9
    分子式:C60H105O12N17
    平均分子量:1256.58
    精确分子量:1255.81
    等电点(PI):-
    pH=7.0时的净电荷数:3
    平均亲水性:0.4875
    疏水性值:-0.73
    外观与性状:白色粉末状固体
    消光系数:-
    来源:人工化学合成,仅限科学研究使用,不得用于人体。
    纯度:95%、98%
    盐体系:可选TFA、HAc、HCl或其它
    储存条件:负80℃至负20℃
    标签:烷基化肽    酶底物肽(Substrate Peptide)    抑制剂相关肽(Inhibitor Peptide)   

  • The myristoylated nonapeptide Myr-FARKGALRQ corresponding to the pseudosubstrate domain of PKC-α and -β subtypes represents a selective and cell-permeable inhibitor of PKC in intact cells.

    烷基化肽-说明

    专肽生物可提供多肽烷基化修饰,增加多肽一端的疏水性,例如常见的C18,C16,C14,C12,以及C6等,也可根据客户要求,接其他长度的烷基化链。

     Caspase酶对应的底物,Caspases(半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,半胱氨酸依赖性天冬氨酸定向蛋白酶)是一类蛋白酶家族,其功能与凋亡(程序性细胞死亡),坏死和发烧(炎症)的过程密切相关。

           什么是胱天蛋白酶?

          胱天蛋白酶(Caspases)是含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶,它们是为细胞凋亡的主要介质。多种受体,例如TNF-α 受体,FasL受体,TLR和死亡受体,以及Bcl-2和凋亡抑制剂(IAP)蛋白家族参与并调节该caspase依赖性凋亡途径。一旦Caspase受到上游信号(外部或内在)刺激被激活,即会参与执行下游蛋白底物的水解作用,并触发一系列事件,导致细胞分解,死亡,吞噬作用和细胞碎片的清除。

          人Caspases酶

          人的Caspases家族基于序列相似性和生物学功能等共性主要可分为三大类:第一类由具有长胱天蛋白酶募集结构域的“炎症”胱天蛋白酶组成,他们对P4位上的较大的芳香族或疏水性残基具有亲和力。第二类由具有短的前体结构域的“细胞凋亡效应”胱天蛋白酶组成,而第三类由具有长的前提结构域的Pap位置具有亮氨酸或缬氨酸底物亲和力的“凋亡引发剂”胱天蛋白酶组成(表1)。

           表1. 人胱天蛋白酶的功能分类:

    细胞死亡途径 半胱天冬酶类型 酵素 物种
    细胞凋亡 启动器 Caspases 2 人与鼠
    细胞凋亡 启动器 Caspases 8 人与鼠
    细胞凋亡 启动器 Caspases 9 人与鼠
    细胞凋亡 启动器 Caspases 10 人的
    细胞凋亡 效应器 Caspases 3 人与鼠
    细胞凋亡 效应器 Caspases 6 人与鼠
    细胞凋亡 效应器 Caspases 6 人与鼠
    细胞焦亡 炎性的 Caspases 1 人与鼠
    细胞焦亡 炎性的 Caspases 4 人的
    细胞焦亡 炎性的 Caspases 5 人的

           启动器Caspase和效应器Caspase酶

          根据其在凋亡胱天蛋白酶途径中的作用,胱天蛋白酶可分为两类:启动器和效应器Caspase酶。启动器和效应器Caspas酶都具有由小亚基和大亚基组成的催化位点,Caspase酶的识别位

          凋亡启动器Caspase酶,例如caspase-2,-8,-9和-10可以启动caspase激活级联反应。Caspase-8对于形成死亡诱导信号复合物(DISC)是必不可少的,并且在激活后,Caspase-8激活下游效应子Caspase(例如Caspase 3)并介导线粒体中细胞色素c的释放。Caspase-8已被证明对IETD肽序列具有相对较高的底物选择性。凋亡效应胱天蛋白酶例如Caspase-3,-6和-7虽然不负责启动级联途径,但是当被激活时,它们在级联的中间和后续步骤中起着不可或缺的作用。Caspase-3(CPP32 / apopain)是关键效应器,因为它放大了来自启动器Caspase的信号,使用对Caspase-3有选择性的DEVD肽序列对活化的Caspase-3进行检测,可以检测Caspase-3的活性。

           Caspase酶底物和抑制剂

          Caspase底物和抑制剂由两个关键成分组成:Caspase识别序列和信号产生或蛋白酶抑制基序。不同Caspase识别序列不同,一般由三个或四个氨基酸组成(表2)。Caspase酶识别序列的N端通常有乙酰基(Ac)或碳苯甲氧基(Z)基团修饰,以增强膜的通透性。对应的Caspase识别特定的肽序列为其酶促反应切割位点,释放产生信号或抑制信号的基序。Caspase的显色和荧光底物均以相似的方式起作用,其中底物的信号或颜色强度与蛋白水解活性成正比。

           表2. Caspase的底物及其序列

    多肽 氨基酸序列 对应的Caspase的种类
    IETD Ile-Glu-Thr-Asp Caspase 8,颗粒酶B
    DEVD Asp-Glu-Val-Asp Caspase 3、6、7、8或10
    LEHD Leu-Glu-His-Asp Caspase 9
    VAD Val-Ala-Asp Caspase 1、2、3、6、8、9或10

             Caspase酶的显色底物

          Caspase的显色底物是有Caspase识别序列及生色基团组成,常见的生色团有pNA(对硝基苯胺或4-硝基苯胺),可使用酶标仪或分光光度计在405 nm处进行光密度检测。

           表3. Caspase的显色底物

    底物 Caspase 吸收(nm) 颜色
    Ac-DEVD-pNA * CAS 189950-66-1 * 半胱天冬酶3 405 nm 黄色
    Z-DEVD-pNA 半胱天冬酶3 405 nm 黄色
    Z-IETD-pNA * CAS 219138-21-3 * 半胱天冬酶8,颗粒酶B 405 nm 黄色

           Caspase的荧光底物

          Caspase的荧光底物的结构包含与半胱天冬酶识别相关的荧光团,例如7-氨基-4-甲基香豆素(AMC),7-氨基-4-三氟甲基香豆素(AFC), Rhodamine 110(R110)或ProRed™620。R110的Caspase底物比基于香豆素的Caspase底物(例如AMC和AFC)更敏感,但由于两步裂解过程,其动态范围更窄。 建议将R110标记的Caspase底物用于终点法测定,而将AMC和AFC标记的 Caspase底物用于动力学测定。

          图.从左到右,分别是AMC(7-氨基-4-甲基香豆素),AFC(7-氨基-4-三氟甲基香豆素),Rhodamine 110(R110)和ProRed™620的激发和发射光谱。

           表4.荧光半胱天冬酶底物。

    底物名称 对应的Caspase Ex(nm) Em(nm) ε¹ Φ²
    Ac-DEVD-AFC * CAS 201608-14-2 * 半胱天冬酶3、7 376 482 17000 0.53
    Ac-DEVD-AMC * CAS 169332-61-0 * 半胱天冬酶3、7 341 441 19000 N / D
    Z-DEVD-AFC 半胱天冬酶3、7 376 482 17000 0.53
    Z-DEVD-AMC * CAS 1135416-11-3 * 半胱天冬酶3、7 341 441 19000 N / D
    Z-DEVD-ProRed™620 半胱天冬酶3、7 532 619 N / D N / D
    (Z-DEVD)2 -R110 * CAS 223538-61-2 * 半胱天冬酶3、7 500 522 80000 N / D
    Z-DEVD-ProRed™620 半胱天冬酶3、7 532 619 N / D N / D
    Ac-IETD-AFC * CAS 211990-57-7 * 半胱天冬酶8,颗粒酶B 376 482 17000 0.53
    Z-IETD-AFC * CAS 219138-02-0 * 半胱天冬酶8,颗粒酶B 376 482 17000 0.53

           注意:

            1.ε=在其最大吸收波长处的摩尔消光系数(单位= cm -1-1)。

          2.Φ=水性缓冲液(pH 7.2)中的荧光量子产率。

           Caspase抑制剂

          Caspase抑制剂能与Caspase的活性位点结合并形成可逆或不可逆的连接,通常,Caspase抑制剂的结构由Caspase识别序列,诸如醛(-CHO)或氟甲基酮(-FMK)的官能团组成。具有醛官能团的胱天蛋白酶抑制剂是可逆的,而具有FMK的抑制剂是不可逆的。半胱天冬酶底物和抑制剂都具有较小的细胞毒性作用,因此,它们是研究半胱天冬酶活性的有用工具。

           表5. 可逆和不可逆的Caspase酶抑制剂

    抑制剂 Caspase的种类 是否可逆 Ex(nm) Em(nm)
    Ac-DEVD-CHO * CAS 169332-60-9 * 半胱天冬酶3、7 可逆的 -- --
    Ac-IETD-CHO * CAS 191338-86-0 * 半胱天冬酶8 可逆的 -- --
    mFluor™450-VAD-FMK 半胱天冬酶1,2,3,6,8,9,10 不可逆的 406 445
    mFluor™510-VAD-FMK 半胱天冬酶1,2,3,6,8,9,10 不可逆的 412 505
    FITC-C6-DEVD-FMK 半胱天冬酶3、7 不可逆的 491 516
    FITC-C6-DEVD-FMK 半胱天冬酶3、7 不可逆的 491 516
    FITC-C6-LEHD-FMK 半胱天冬酶9 不可逆的 491 516
    FITC-C6-LEHD-FMK 半胱天冬酶9 不可逆的 491 516
    FAM-VAD-FMK 半胱天冬酶1,2,3,6,8,9,10 不可逆的 493 517
    SRB-VAD-FMK [磺胺丁胺B-VAD-FMK] 半胱天冬酶1,2,3,6,8,9,10 不可逆的 559 577

    定义
    酶是用于生化反应的非常有效的催化剂。它们通过提供较低活化能的替代反应途径来加快反应速度。酶作用于底物并产生产物。一些物质降低或什至停止酶的催化活性被称为抑制剂。
    发现
    1965年,Umezawa H分析了微生物产生的酶抑制剂,并分离出了抑制亮肽素和抗痛药的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,乳糜蛋白酶抑制的胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶抑制素抑制胃蛋白酶,泛磷酰胺抑制唾液酸酶,乌藤酮抑制酪氨酸羟化酶,多巴汀抑制多巴胺3-羟硫基嘧啶和多巴胺3-羟色胺酶酪氨酸羟化酶和多巴胺J3-羟化酶。最近,一种替代方法已应用于预测新的抑制剂:合理的药物设计使用酶活性位点的三维结构来预测哪些分子可能是抑制剂1。已经开发了用于识别酶抑制剂的基于计算机的方法,例如分子力学和分子对接。
    结构特征
    已经确定了许多抑制剂的晶体结构。已经确定了三种与凝血酶复合的高效且选择性的低分子量刚性肽醛醛抑制剂的晶体结构。这三种抑制剂全部在P3位置具有一个新的内酰胺部分,而对胰蛋白酶选择性最高的两种抑制剂在P1位置具有一个与S1特异性位点结合的胍基哌啶基。凝血酶的抑制动力学从慢到快变化,而对于胰蛋白酶,抑制的动力学在所有情况下都快。根据两步机理2中稳定过渡态络合物的缓慢形成来检验动力学。
    埃米尔•菲舍尔(Emil Fischer)在1894年提出,酶和底物都具有特定的互补几何形状,彼此恰好契合。这称为“锁和钥匙”模型3。丹尼尔·科什兰(Daniel Koshland)提出了诱导拟合模型,其中底物和酶是相当灵活的结构,当底物与酶4相互作用时,活性位点通过与底物的相互作用不断重塑。
    在众多生物活性肽的成熟过程中,需要由其谷氨酰胺(或谷氨酰胺)前体形成N末端焦谷氨酸(pGlu)。游离形式并与底物和三种咪唑衍生抑制剂结合的人QC的结构揭示了类似于两个锌外肽酶的α/β支架,但有多个插入和缺失,特别是在活性位点区域。几种活性位点突变酶的结构分析为针对QC相关疾病5的抑制剂的合理设计提供了结构基础。
    作用方式
    酶是催化化学反应的蛋白质。酶与底物相互作用并将其转化为产物。抑制剂的结合可以阻止底物进入酶的活性位点和/或阻止酶催化其反应。抑制剂的种类繁多,包括:非特异性,不可逆,可逆-竞争性和非竞争性。可逆抑制剂 以非共价相互作用(例如疏水相互作用,氢键和离子键)与酶结合。非特异性抑制方法包括最终使酶的蛋白质部分变性并因此不可逆的任何物理或化学变化。特定抑制剂 对单一酶发挥作用。大多数毒药通过特异性抑制酶发挥作用。竞争性抑制剂是任何与底物的化学结构和分子几何结构非常相似的化合物。抑制剂可以在活性位点与酶相互作用,但是没有反应发生。非竞争性抑制剂是与酶相互作用但通常不在活性位点相互作用的物质。非竞争性抑制剂的净作用是改变酶的形状,从而改变活性位点,从而使底物不再能与酶相互作用而产生反应。非竞争性抑制剂通常是可逆的。不可逆抑制剂与酶形成牢固的共价键。这些抑制剂可以在活性位点附近或附近起作用。
    功能
    工业应用中, 酶在商业上被广泛使用,例如在洗涤剂,食品和酿造工业中。蛋白酶用于“生物”洗衣粉中,以加速蛋白质在诸如血液和鸡蛋等污渍中的分解。商业上使用酶的问题包括:它们是水溶性的,这使得它们难以回收,并且一些产物可以抑制酶的活性(反馈抑制)。
    药物分子,许多药物分子都是酶抑制剂,药用酶抑制剂通常以其特异性和效力为特征。高度的特异性和效力表明该药物具有较少的副作用和较低的毒性。酶抑制剂在自然界中发现,并且也作为药理学和生物化学的一部分进行设计和生产6。
    天然毒物 通常是酶抑制剂,已进化为保护植物或动物免受天敌的侵害。这些天然毒素包括一些已知最剧毒的化合物。
    神经气体( 例如二异丙基氟磷酸酯(DFP))通过与丝氨酸的羟基反应生成酯,从而抑制了乙酰胆碱酯酶的活性位点。
    参考
    1、Scapin G (2006). Structural biology and drug discovery. Curr. Pharm. Des.,      12(17):2087–2097.
    2、Krishnan R, Zhang E, Hakansson K, Arni RK, Tulinsky A, Lim-Wilby MS, Levy OE, Semple JE, Brunck TK (1998). Highly selective mechanism-based thrombin inhibitors:  structures of thrombin and trypsin inhibited with rigid peptidyl aldehydes. Biochemistry, 37 (35):12094-12103.
    3、Fischer E (1894). Einfluss der configuration auf die wirkung der enzyme. Ber. Dt. Chem. Ges., 27:2985–2993.
    4、Koshland DE (1958). Application of a theory of enzyme specificity to protein synthesis. PNAS., 44 (2):98–104.
    5、Huang KF, Liu YL, Cheng WJ, Ko TP, Wang AH (2005). Crystal structures of human glutaminyl cyclase, an enzyme responsible for protein N-terminal pyroglutamate formation. PNAS., 102(37):13117-13122.
    6、Holmes CF, Maynes JT, Perreault KR, Dawson JF, James MN (2002). Molecular enzymology underlying regulation of protein phosphatase-1 by natural toxins. Curr Med Chem., 9(22):1981-1989.

     

    Definition
    Enzymes are very efficient catalysts for biochemical reactions. They speed up reactions by providing an alternative reaction pathway of lower activation energy. Enzyme acts on substrate and gives rise to a product. Some substances reduce or even stop the catalytic activities of enzymes are called inhibitors.

    Discovery
    In 1965, Umezawa H analysed enzyme inhibitors produced by microorganisms and isolated leupeptin and antipain inhibiting trypsin and papain, chymostatin inhibiting chymotrypsin, pepstatin inhibiting pepsin, panosialin inhibiting sialidases, oudenone inhibiting tyrosine hydroxylase, dopastin inhibiting dopamine 3-hydroxylase, aquayamycin and chrothiomycin inhibiting tyrosine hydroxylase and dopamine J3-hydroxylase . Recently, an alternative approach has been applied to predict new inhibitors: rational drug design uses the three-dimensional structure of an enzyme's active site to predict which molecules might be inhibitors 1. Computer-based methods for identifying inhibitor for an enzyme have been developed, such as molecular mechanics and molecular docking.

    Structural Characteristics
    The crystal structures of many inhibitors have been determined. The crystal structures of three highly potent and selective low-molecular weight rigid peptidyl aldehyde inhibitors complexed with thrombin have been determined. All the three inhibitors have a novel lactam moiety at the P3 position, while the two with greatest trypsin selectivity have a guanidinopiperidyl group at the P1 position that binds in the S1 specificity site. The kinetics of inhibition vary from slow to fast with thrombin and are fast in all cases with trypsin. The kinetics are examined in terms of the slow formation of a stable transition-state complex in a two-step mechanism 2.

    Emil Fischer in 1894 suggested that both the enzyme and the substrate possess specific complementary geometric shapes that fit exactly into one another.This is known as "the lock and key" model 3. Daniel Koshland suggested induced fit model where substrate and enzymes are rather flexible structures, the active site is continually reshaped by interactions with the substrate as the substrate interacts with the enzyme 4.

    N-terminal pyroglutamate (pGlu) formation from its glutaminyl (or glutamyl) precursor is required in the maturation of numerous bioactive peptides. The structure of human QC in free form and bound to a substrate and three imidazole-derived inhibitors reveals an alpha/beta scaffold akin to that of two-zinc exopeptidases but with several insertions and deletions, particularly in the active-site region. The structural analyses of several active-site-mutant enzymes provide a structural basis for the rational design of inhibitors against QC-associated disorders 5.

    Mode of Action
    Enzymes are proteins that catalyze chemical reactions. Enzymes interact with substrate and convert them into products. Inhibitor binding can stop a substrate from entering the enzyme's active site and/or hinder the enzyme from catalyzing its reaction. There are a variety of types of inhibitors including: nonspecific, irreversible, reversible - competitive and noncompetitive. Reversible inhibitors bind to enzymes with non-covalent interactions like hydrophobic interactions, hydrogen bonds, and ionic bonds. Non-specific methods of inhibition include any physical or chemical changes which ultimately denature the protein portion of the enzyme and are therefore irreversible. Specific Inhibitors exert their effects upon a single enzyme. Most poisons work by specific inhibition of enzymes. A competitive inhibitor is any compound which closely resembles the chemical structure and molecular geometry of the substrate. The inhibitor may interact with the enzyme at the active site, but no reaction takes place. A noncompetitive inhibitor is a substance that interacts with the enzyme, but usually not at the active site.  The net effect of a non competitive inhibitor is to change the shape of the enzyme and thus the active site, so that the substrate can no longer interact with the enzyme to give a reaction. Non competitive inhibitors are usually reversible. Irreversible Inhibitors form strong covalent bonds with an enzyme.  These inhibitors may act at, near, or remote from the active site .

    Functions
    Industrial application, enzymes are widely used commercially, for example in the detergent, food and brewing industries. Protease enzymes are used in 'biological' washing powders to speed up the breakdown of proteins in stains like blood and egg. Problems using enzymes commercially include: they are water soluble which makes them hard to recover and some products can inhibit the enzyme activity (feedback inhibition) .

    Drug molecules, many drug molecules are enzyme inhibitors and a medicinal enzyme inhibitor is usually characterized by its specificity and its potency. A high specificity and potency suggests that a drug will have fewer side effects and less toxic. Enzyme inhibitors are found in nature and are also designed and produced as part of pharmacology and biochemistry 6.

    Natural poisons are often enzyme inhibitors that have evolved to defend a plant or animal against predators. These natural toxins include some of the most poisonous compounds known.

    Nerve gases such as diisopropylfluorophosphate (DFP) inhibit the active site of acetylcholine esterase by reacting with the hydroxyl group of serine to make an ester.

    References

    Scapin G (2006). Structural biology and drug discovery. Curr. Pharm. Des.,      12(17):2087–2097.

    Krishnan R, Zhang E, Hakansson K, Arni RK, Tulinsky A, Lim-Wilby MS, Levy OE, Semple JE, Brunck TK (1998). Highly selective mechanism-based thrombin inhibitors:  structures of thrombin and trypsin inhibited with rigid peptidyl aldehydes. Biochemistry, 37 (35):12094-12103.

    Fischer E (1894). Einfluss der configuration auf die wirkung der enzyme. Ber. Dt. Chem. Ges., 27:2985–2993.

    Koshland DE (1958). Application of a theory of enzyme specificity to protein synthesis. PNAS., 44 (2):98–104.

    Huang KF, Liu YL, Cheng WJ, Ko TP, Wang AH (2005). Crystal structures of human glutaminyl cyclase, an enzyme responsible for protein N-terminal pyroglutamate formation. PNAS., 102(37):13117-13122.

    Holmes CF, Maynes JT, Perreault KR, Dawson JF, James MN (2002). Molecular enzymology underlying regulation of protein phosphatase-1 by natural toxins. Curr Med Chem., 9(22):1981-1989.

  • T.Eichholtz et al., J. Biol. Chem., 268, 1982(1993) : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=8420972

  • 多肽Myristicacid-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-COOH的合成步骤:

    1、合成CTC树脂:称取0.93g CTC Resin(如初始取代度约为1.18mmol/g)和1.32mmol Fmoc-Gln(Trt)-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入3.29mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到  Fmoc-Gln(Trt)-CTC Resin。结构图如下:

    2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Gln(Trt)-CTC Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:

    3、缩合:取3.29mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入6.58mmol DIPEA,3.13mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:

    4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到

    H2N-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    H2N-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    H2N-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    Fmoc-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    H2N-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    Fmoc-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    H2N-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    Fmoc-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    H2N-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    H2N-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    Fmoc-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin

    以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。

    最后再经过步骤二得到 H2N-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTC Resin,结构如下:

    5、肉豆蔻酸反应连接:在上述树脂中,加入适当DMF后,再加入3.29mmol 肉豆蔻酸到树脂中,再加入6.58mmol DIPEA、3.13mmol HBTU,鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。 得到Myristicacid-Phe-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Leu-Arg(Pbf)-Gln(Trt)-CTCResin。 结构如下:

    6、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品Myristicacid-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln-COOH。结构图见产品结构图。

    切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%

    2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%

    3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%

    (前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)

    6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

    7、最后总结:

    杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽

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