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专注多肽 服务科研
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脑利钠肽或B型利钠肽（BNP）（也称为心室利钠肽）是由心室分泌的32个氨基酸的肽，以响应心肌细胞（心肌细胞）的过度拉伸。
编号：145475
CAS号：117345-87-6
单字母：H2N-SPKTMRDSGCFGRRLDRIGSLSGLGCNVLRRY-OH(Disulfide Bridge:C10-C26)
| 编号: | 145475 |
| 中文名称: | BNP(1-32), porcine |
| 英文名: | BNP(1-32), porcine |
| CAS号: | 117345-87-6 |
| 单字母: | H2N-SPKTMRDSGCFGRRLDRIGSLSGLGCNVLRRY-OH(Disulfide Bridge:C10-C26) |
| 三字母: | H2N-Ser-Pro-Lys-Thr-Met-Arg-Asp-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Val-Leu-Arg-Arg-Tyr-OH(Disulfide Bridge:Cys10-Cys26) |
| 氨基酸个数: | 32 |
| 分子式: | C149H250N52O44S3 |
| 平均分子量: | 3570.1 |
| 精确分子量: | 3567.81 |
| 等电点(PI): | 12.81 |
| pH=7.0时的净电荷数: | 8.91 |
| 平均亲水性: | 0.31923076923077 |
| 疏水性值: | -0.51 |
| 外观与性状: | 白色粉末状固体 |
| 消光系数: | 1490 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 纯度: | 95%、98% |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl或其它 |
| 生成周期: | 2-3周 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 心血管(Cardiovascular)系统 二硫键环肽 含Cys多肽 |
| 参考文献（References）: | T. Sudoh et al., BBRC, 155, 726 (1988) |
脑利钠肽或B型利钠肽（BNP）（也称为心室利钠肽）是由心室分泌的32个氨基酸的肽，以响应心肌细胞（心肌细胞）的过度拉伸。
Brain natriuretic peptide or B-type natriuretic peptide (BNP) (also ventricular natriuretic peptide) is a 32-amino acid peptide secreted by heart ventricles in response to excessive stretching of heart muscle cells (cardiomyocytes).
二硫键广泛存在与蛋白结构中，对稳定蛋白结构具有非常重要的意义，二硫键一般是通过序列中的2个Cys的巯基，经氧化形成。
形成二硫键的方法很多：空气氧化法，DMSO氧化法，过氧化氢氧化法等。
二硫键的合成过程， 可以通过Ellman检测以及HPLC检测方法对其反应进程进行监测。
如果多肽中只含有1对Cys，那二硫键的形成是简单的。多肽经固相或液相合成，然后在pH8-9的溶液中进行氧化。
当需要形成2对或2对以上的二硫键时，合成过程则相对复杂。尽管二硫键的形成通常是在合成方案的最后阶段完成，但有时引入预先形成的二硫化物是有利于连合或延长肽链的。通常采用的巯基保护基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。我们分别列出两种以2-Cl树脂和Rink树脂为载体合成的多肽上多对二硫键形成路线：
二硫键反应条件选择
二硫键即为蛋白质或多肽分子中两个不同位点Cys的巯基（-SH）被氧化形成的S-S共价键。 一条肽链上不同位置的氨基酸之间形成的二硫键，可以将肽链折叠成特定的空间结构。多肽分 子通常分子量较大，空间结构复杂，结构中形成二硫键时要求两个半胱氨酸在空间距离上接近。 此外，多肽结构中还原态的巯基化学性质活泼，容易发生其他的副反应，而且肽链上其他侧链 也可能会发生一系列修饰，因此，肽链进行修饰所选取的氧化剂和氧化条件是反应的关键因素， 反应机理也比较复杂，既可能是自由基反应，也可能是离子反应。
反应条件有多种选择，比如空气氧化，DMSO氧化等温和的氧化过程，也可以采用H2O2，I2， 汞盐等激烈的反应条件。
空气氧化法： 空气氧化法形成二硫键是多肽合成中最经典的方法，通常是将巯基处于还原态的多肽溶于水中，在近中性或弱碱性条件下（PH值6.5-10），反应24小时以上。为了降低分子之间二硫键形成的可能，该方法通常需要在低浓度条件下进行。
碘氧化法：将多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10-15mol/L的碘进行氧化，反应15-40min。当肽链中含有对碘比较敏感的Tyr、Trp、Met和His的残基时，氧化条件要控制的更精确，氧化完后，立即加入维生素C或硫代硫酸钠除去过量的碘。 当序列中有两对或多对二硫键需要成环时，通常有两种情况：
自然随机成环: 序列中的Cys之间随机成环，与一对二硫键成环条件相似；
定点成环： 定点成环即序列中的Cys按照设计要求形成二硫键，反应过程相对复杂。在 固相合成多肽之前，需要提前设计几对二硫键形成的顺序和方法路线，选择不同的侧链 巯基保护基，利用其性质差异，分步氧化形成两对或多对二硫键。 通常采用的巯基保护 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。
多肽H2N-Ser-Pro-Lys-Thr-Met-Arg-Asp-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Val-Leu-Arg-Arg-Tyr-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取0.31g CTC Resin（如初始取代度约为0.31mmol/g）和0.12mmol Fmoc-Tyr(tBu)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入0.29mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Tyr(tBu)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Tyr(tBu)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取0.29mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入0.58mmol DIPEA，0.27mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Pro-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
H2N-Pro-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Thr(tBu)-Met-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Leu-Asp(OtBu)-Arg(Pbf)-Ile-Gly-Ser(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Asn(Trt)-Val-Leu-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Tyr(tBu)-CTC Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Ser-Pro-Lys-Thr-Met-Arg-Asp-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Arg-Leu-Asp-Arg-Ile-Gly-Ser-Leu-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Val-Leu-Arg-Arg-Tyr-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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