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专注多肽 服务科研
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源自鼠PAR-4的蛋白酶激活受体-4激活肽。该肽能够引起大鼠血小板聚集，EC50值为40？M、 它对白细胞滚动和粘附的影响指向PAR-4在介导促炎过程中的作用。
编号：122279
CAS号：245443-52-1
单字母：H2N-GYPGKF-CONH2
| 编号: | 122279 |
| 中文名称: | 蛋白酶活化的受体-4、Protease-Activated Receptor-4、 PAR-4 (1-6) amide (mouse) |
| 英文名: | Protease-Activated Receptor-4、 PAR-4 (1-6) amide (mouse) |
| CAS号: | 245443-52-1 |
| 单字母: | H2N-GYPGKF-CONH2 |
| 三字母: | H2N N端氨基：N-terminal amino group。在肽或多肽链中含有游离a-氨基的氨基酸一端。在表示氨基酸序列时，通常将N端放在肽链的左边。 -Gly甘氨酸：glycine。系统命名为 2-氨基乙酸。是编码氨基酸中没有旋光性的最简单的氨基酸，因具有甜味而得名。符号：G，Gly。 -TyrL-酪氨酸：tyrosine。系统命名为(2S)-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸。是编码氨基酸。符号：Y，Tyr。 -ProL-脯氨酸：proline。系统命名为吡咯烷-(2S)-羧酸。为亚氨基酸。是编码氨基酸。在肽链中有特殊作用，如易形成顺式的肽键等。符号：P，Pro。 -Gly甘氨酸：glycine。系统命名为 2-氨基乙酸。是编码氨基酸中没有旋光性的最简单的氨基酸，因具有甜味而得名。符号：G，Gly。 -LysL-赖氨酸：lysine。系统命名为(2S)-6-二氨基已酸。是编码氨基酸中的碱性氨基酸，哺乳动物的必需氨基酸。在蛋白质中的赖氨酸可以被修饰为多种形式的衍生物。符号：K，Lys。 -PheL-苯丙氨酸：phenylalanine。系统命名为(2S)-氨基-3-苯基丙酸。是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：F，Phe。 -CONH2C端酰胺化 |
| 氨基酸个数: | 6 |
| 分子式: | C33H46N8O7 |
| 平均分子量: | 666.77 |
| 精确分子量: | 666.35 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | 2.97 |
| 酸性基团个数: | 2 |
| 碱性基团个数: | 疏水 |
| 平均亲水性: | -0.96666666666667 |
| 疏水性值: | -0.73 |
| 外观与性状: | 白色粉末状固体 |
| 消光系数: | 1490 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 纯度: | 95%、98% |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl或其它 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 血液学(Hematology) |
| 参考文献（References）: | N.Vergnolle, J. Immunol., 163, 5064 (1999) M.D.Hollenberg and M.Saifeddine, Can. J. Physiol. Pharmacol., 79, 439 (2001) Fang, J. et al. Blood 106, 2671(2005) Mulè, F. et al. Gut. 53, 229 (2004) Sekiguchi, F. et al. Drug Design Rev. 1, 287 (2004) Faruqi, T. et al. J. Biol. Chem. 275, 19728 (2000) Greenberg, D. Biochem. 42, 2702 (2003) Henriksen, R. and V. Hanks, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 22, 861 (2002) Gui, Y. et al. Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 285, 95 (2003) |
Protease-Activated Receptor-4 是转化生长因子受体 4 的激动剂。
Protease-Activated Receptor-4 is the agonist of proteinase-activated receptor-4 (PAR4).
这是一种模拟内源性人表皮生长因子（EGF）并与toll样受体结合的合成肽。它已被证明可以刺激肠道疾病和心脏疾病以及癌症组织的实验模型中的生理功能。该肽还与鸟嘌呤核苷酸结合蛋白，聚合酶链反应和炎症性肠病基因结合。体内研究证实，该肽可增强母体血液中EGF的产生，并刺激动物模型中鳞状细胞癌的生长。
This is a synthetic peptide that mimics the endogenous human epidermal growth factor (EGF) and binds to the toll-like receptor. It has been shown to stimulate physiological function in experimental models of bowel disease and cardiac disease, as well as cancer tissues. The peptide also binds to the guanine nucleotide-binding protein, polymerase chain reaction, and inflammatory bowel disease genes. In vivo studies have confirmed that this peptide enhances the production of EGF in maternal blood and stimulates squamous carcinoma growth in an animal model.
凝血酶是凝血级联的主要效应物-它是一种丝氨酸蛋白酶。凝血酶与属于G蛋白偶联受体（GPCR）亚家族的活性蛋白酶激活受体（PAR）结合。小鼠PAR-4的凝血酶激活揭示了GYPGKF的氨基末端序列。这是PAR-4的天然配体。GYPGKF在内部与受体结合并导致信号激活。将GYPGKF鉴定为PAR-4激动剂可以更好地了解PAR的功能。将GYPGKF添加到表达PAR-4的细胞系中可以实现凝血酶最大反应的55%。GYPGKF可以提供对PAR-4的理解以及更有效的激动剂的模板。
Thrombin is the main effector of the coagulation cascade- it is a serine protease. Thrombin binds to active protease activated receptor (PAR) which belongs to a subfamily of G-protein coupled receptors (GPCR). Thrombin activation of mouse PAR-4 reveals an amino terminus sequence of GYPGKF. This is the natural ligand for PAR-4. GYPGKF binds internally to the receptor and leads to signalling activation. Identification of GYPGKF as a PAR-4 agonist has allowed better understand of the function of PAR. Addition of GYPGKF to PAR-4 expressing cell lines achieved 55% of the maximal response of thrombin. GYPGKF can provide understanding of PAR-4 and a template for more potent agonists.
源自鼠PAR-4的蛋白酶激活受体-4激活肽。该肽能够引起大鼠血小板聚集，EC50值为40？M、 它对白细胞滚动和粘附的影响指向PAR-4在介导促炎过程中的作用。至少七个跨膜G蛋白偶联受体家族包括至少四种受体亚型（PAR1，PAR2，PAR3，PAR4）。PAR4激活肽GYPGKF-NH2和AYPGKG-NH2对肌肉产生浓度依赖性收缩作用。
Protease-activated receptor-4 activating peptide derived from murine PAR-4. This peptide was able to cause rat platelet aggregation with an EC50 value of 40 ?M. Its effect on leucocyte rolling and adherence points at a role of PAR-4 in mediating proinflammatory processes. The family of at least seven transmembrane G protein coupled receptors includes at least four receptor subtypes (PAR1, PAR2, PAR3, PAR4). PAR4 activating peptides, GYPGKF-NH2 and AYPGKG-NH2, produce concentration dependent contractile effects on the muscle.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1016/j.regpep.2014.03.001 | Proteinase-activated receptor-1 (PAR1) and PAR2 mediate relaxation of guinea pig internal anal sphincter | 下载 |
| 10.1080/09537104.2017.1282607 | Molecular requirements involving the human platelet protease-activated receptor-4 mechanism of activation by peptide analogues of its tethered-ligand | 下载 |
多肽H2N-Gly-Tyr-Pro-Gly-Lys-Phe-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克的MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取2.04g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取1.84mmol Fmoc-Phe-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入3.67mmol DIPEA，1.74mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Phe-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
H2N-Tyr(tBu)-Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gly-Tyr(tBu)-Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Gly-Tyr(tBu)-Pro-Gly-Lys(Boc)-Phe-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Gly-Tyr-Pro-Gly-Lys-Phe-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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