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磷脂酰丝氨酸（PS）分子从细胞质膜的内层暴露到外层已被公认为细胞凋亡过程中的一种明确的分子表位。对PS暴露情况的检测和监测是多种临床条件下非侵入性细胞凋亡成像中广泛使用的分子标志物，包括评估抗癌药物的疗效和心肌梗死。在此，文章报告了一种通过筛选M13噬菌体展示肽库在PS涂层的酶联免疫吸附测定板上鉴定出的PS识别肽。经过四轮反复生物淘选，显示肽序列为CLSYYPSYC的噬菌体克隆显著富集（46%）。所鉴定的噬菌体克隆对多种凋亡细胞的结合能力明显高于非凋亡细胞，且这种结合被膜联蛋白V和噬菌体展示的合成肽所抑制。通过流式细胞术分析和荧光显微镜观察评估了荧光素标记的CLSYYPSYC肽对凋亡细胞与正常细胞的结合情况。给荷瘤裸鼠（H460细胞异种移植模型）全身注射荧光素标记的CLSYYPSYC肽，并用单剂量抗癌药物（喜树碱）处理后进行光学成像，结果表明该肽可归巢至肿瘤。对肿瘤组织进行的组织学检查显示肿瘤血管和凋亡肿瘤细胞有强烈的染色。基于这些结果，CLSYYPSYC肽被认定为一种新型的PS识别基团，有可能被开发成一种用于体内凋亡成像的分子探针。这种应用显然与评估肿瘤抗癌治疗的效果相关。

二硫键广泛存在与蛋白结构中，对稳定蛋白结构具有非常重要的意义，二硫键一般是通过序列中的2个Cys的巯基，经氧化形成。
 

形成二硫键的方法很多：空气氧化法，DMSO氧化法，过氧化氢氧化法等。
 

二硫键的合成过程，  可以通过Ellman检测以及HPLC检测方法对其反应进程进行监测。  
   

如果多肽中只含有1对Cys，那二硫键的形成是简单的。多肽经固相或液相合成，然后在pH8-9的溶液中进行氧化。      
 

当需要形成2对或2对以上的二硫键时，合成过程则相对复杂。尽管二硫键的形成通常是在合成方案的最后阶段完成，但有时引入预先形成的二硫化物是有利于连合或延长肽链的。通常采用的巯基保护基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。我们分别列出两种以2-Cl树脂和Rink树脂为载体合成的多肽上多对二硫键形成路线：
 

二硫键反应条件选择    
 

 二硫键即为蛋白质或多肽分子中两个不同位点Cys的巯基（-SH）被氧化形成的S-S共价键。 一条肽链上不同位置的氨基酸之间形成的二硫键，可以将肽链折叠成特定的空间结构。多肽分 子通常分子量较大，空间结构复杂，结构中形成二硫键时要求两个半胱氨酸在空间距离上接近。 此外，多肽结构中还原态的巯基化学性质活泼，容易发生其他的副反应，而且肽链上其他侧链 也可能会发生一系列修饰，因此，肽链进行修饰所选取的氧化剂和氧化条件是反应的关键因素， 反应机理也比较复杂，既可能是自由基反应，也可能是离子反应。      

反应条件有多种选择，比如空气氧化，DMSO氧化等温和的氧化过程，也可以采用H2O2，I2， 汞盐等激烈的反应条件。
 

空气氧化法： 空气氧化法形成二硫键是多肽合成中最经典的方法，通常是将巯基处于还原态的多肽溶于水中，在近中性或弱碱性条件下（PH值6.5-10），反应24小时以上。为了降低分子之间二硫键形成的可能，该方法通常需要在低浓度条件下进行。
 

碘氧化法：将多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10-15mol/L的碘进行氧化，反应15-40min。当肽链中含有对碘比较敏感的Tyr、Trp、Met和His的残基时，氧化条件要控制的更精确，氧化完后，立即加入维生素C或硫代硫酸钠除去过量的碘。 当序列中有两对或多对二硫键需要成环时，通常有两种情况：
 

自然随机成环:       序列中的Cys之间随机成环，与一对二硫键成环条件相似；
 

定点成环：       定点成环即序列中的Cys按照设计要求形成二硫键，反应过程相对复杂。在 固相合成多肽之前，需要提前设计几对二硫键形成的顺序和方法路线，选择不同的侧链 巯基保护基，利用其性质差异，分步氧化形成两对或多对二硫键。       通常采用的巯基保护 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。