400-998-5282
专注多肽 服务科研
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高可溶性荧光基质金属蛋白酶（MMP）底物具有以下kcat/km值（pH 7.6，37°C）：MMP-2209.0m-1s-1，MMP-9，40.0m-1s-1，MMP-3，21.0m-1s-1。
编号：163361
CAS号：193475-71-7
单字母：Dabcyl-GABA-PQGL-E(Edans)-AK-CONH2
| 参考文献（References）: | B. Beekman, et al., FEBS Lett, 390, 221 (1996) |
高可溶性荧光基质金属蛋白酶（MMP）底物具有以下kcat/km值（pH 7.6，37°C）：MMP-2209.0m-1s-1，MMP-9，40.0m-1s-1，MMP-3，21.0m-1s-1。使用340 nm的波长和485 nm的发射波长测量荧光增加。EDANS相对较高的发射波长可以方便地测量滑液和培养基等复杂生物介质中的MMP活性。
Highly soluble fluorogenic matrix metalloproteinase (MMP) substrate with the following kcat/km values (at pH 7.6, 37°C): 619.0 M-1s-1 for MMP-2, 209.0 M-1s-1 for MMP-9, 40.0 M-1s-1 for MMP-3, 21.0 M-1s-1 for MMP-1. The fluorescence increase is measured using an wavelength of 340 nm and emission wavelength of 485 nm. The relative high emission wavelength of EDANS allows convenient measurement of MMP activity in complex biological media like synovial fluid and culture medium.
化学预防肽是有助于预防疾病（例如癌症或糖尿病）的发作或发展的肽。这些肽可以源自天然来源，例如大豆或牛奶，也可以来自肽模拟物的设计，也可以源自使用合成肽进行的肽筛选。据认为，这些肽中的某些可以充当细胞周期的调节剂，其调节使细胞通过复制周期前进所需的蛋白质的产生和功能。另外，现在有越来越多的证据表明特定的饮食模式，食物和饮料以及其他饮食物质可以而且确实可以预防癌症。越来越多的流行病学研究表明，食物，营养和身体活动在预防和改变癌症过程中很重要。包括植物蛋白酶抑制剂，乳铁蛋白，乳铁蛋白，凝集素和lunasin在内的不同类型的食物蛋白和多肽似乎起着化学预防剂的作用。如今，蛋白质和多肽被认为是一组营养保健品，在预防癌症的不同阶段（包括起始，促进和进展）方面显示出潜力。此外，已经发现在植物中发现的一些蛋白酶抑制剂，例如豆类和大豆，是有效的癌发生抑制剂。致癌作用是引发和促进癌症的过程。 Bowman-Birk抑制剂和Kunitz胰蛋白酶抑制剂就在其中。目前，这些化合物在致癌作用中的生物学功能主要归因于抑制癌细胞的侵袭和转移，但是，其作用机理仍不完全清楚，需要进一步研究以充分阐明它们。
DABCYL标记说明
4-(4-二甲氨基苯基偶氮)苯甲酰基（Dabcyl）是一种发色团，常与荧光团（如EDANS）结合用作猝灭剂。Dabcyl/EDANS FRET（荧光共振能量转移）对的福斯特半径为3.3纳米。
4-(4-Dimethylaminophenylazo)benzoyl (Dabcyl) is a chromophor often used as a quencher in conjunction with a fluorophore (e.g., EDANS). Dabcyl/EDANS FRET pair have a Forster radius of 3.3 nm.
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Glossary: EDANS
5-[(2-Aminoethyl)amino]naphthalene-1-sulfonyl (EDANS) is fluorophor with an excitation at 340 nm ▉ and emission of 490 nm ▉. EDANS is often paired together with acceptors like dabcyl for FRET experiements.
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EDANS标记说明
5-[(2-Aminoethyl)amino]naphthalene-1-sulfonyl (EDANS) is fluorophore with an excitation at 340 nm ▉ and emission of 490 nm ▉. EDANS are often paired together with acceptors like dabcyl for FRET experiments.
多肽DABCYL-Gaba-Pro-Gln-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取1.1g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取0.99mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入1.98mmol DIPEA，0.94mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gln(Trt)-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Gln(Trt)-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Pro-Gln(Trt)-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
H2N-Pro-Gln(Trt)-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gaba-Pro-Gln(Trt)-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Gaba-Pro-Gln(Trt)-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、4-二甲胺偶氮苯-4’-羧酸(DABCYL)反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入0.99mmol 4-二甲胺偶氮苯-4’-羧酸(DABCYL)到树脂中，再加入1.98mmol DIPEA、0.94mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到DABCYL-Gaba-Pro-Gln(Trt)-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys(Boc)-Linker-MBHAResin。 结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品DABCYL-Gaba-Pro-Gln-Gly-Leu-Glu(Edans)-Ala-Lys-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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