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可被HIV-1蛋白酶在Tyr-Pro位置切割的底物，从而导致荧光强度随时间增加。

Substrate that can be cleaved by the HIV-1 protease at the Tyr-Pro position, thus resulting in a time-dependent increase in the intensity of fluorescence.

Dabcyl-γ-Abu Ser Gln-Asn Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-Edans是一种抑制HIV蛋白酶的双功能肽。该肽与酶的活性位点结合，阻断对催化三联体的访问，抑制其功能。这种肽已被证明可以抑制感染艾滋病毒1型（HIV1）的人类细胞中的病毒生命，以及释放到血液中的病毒颗粒。Dabcyl是HIV1蛋白酶的小分子抑制剂，也抑制细胞蛋白酶。它已被证明可以抑制人类T细胞系（THP1）和感染HIV 1型（HIV1）的其他细胞中的病毒生命。

Dabcyl-γ-Abu-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-Edans is a bifunctional peptide that inhibits HIV protease. The peptide binds to the active site of the enzyme and blocks access to the catalytic triad, inhibiting its function. This peptide has been shown to inhibit viral life in human cells infected with HIV type 1 (HIV1), as well as virions, which are released into the bloodstream. Dabcyl is a small molecule inhibitor of HIV1 protease that also inhibits cellular proteases. It has been shown to inhibit viral life in human T cell lines (THP1) and other cells infected with HIV type 1 (HIV1).

DABCYL-γ- 氨基丁酸 - 丝氨酸 - 谷氨酰胺 - 天冬酰胺 - 酪氨酸 - 脯氨酸 - 异亮氨酸 - 缬氨酸 - 谷氨酰胺 - EDANS 三氟乙酸盐：荧光肽，用于基于荧光共振能量转移（FRET）的测定，含 DABCYL 淬灭剂与 EDANS 荧光团，实时监测肽切割，γ- 氨基丁酸连接子增强稳定性与柔性，可用于蛋白酶活性测定及蛋白加工过程中肽键切割动力学研究。

DABCYL-γ-Abu-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-EDANS trifluoroacetate salt is a fluorescent peptide used in FRET-based assays, incorporating a DABCYL quencher and EDANS fluorophore for real-time monitoring of peptide cleavage. The γ-Abu linker enhances stability and flexibility. Researchers apply it in protease activity assays and to study peptide bond cleavage dynamics in protein processing experiments.

DABCYL‑GABA‑Ser‑Gln‑Asn‑Tyr‑Pro‑Ile‑Val‑Gln‑EDANS 在部分文献中也称为 HIV 蛋白酶底物 I。它广泛用于 HIV 蛋白酶活性的连续检测。人类免疫缺陷病毒 1 型（HIV‑1）编码的 11 kD 蛋白酶（PR）对病毒多蛋白的正确加工与感染性病毒成熟至关重要，因此是选择性获得性免疫缺陷综合征（AIDS）治疗药物设计的靶点。该基于 FRET 的荧光底物源自 HIV‑1 PR 的天然加工位点。重组 HIV‑1 PR 与荧光底物孵育可导致 Tyr‑Pro 键特异性切割，荧光强度随时间增加，与底物水解程度呈线性相关。在 FRET 检测中，HIV‑1 PR 底物的荧光量子产率每摩尔切割底物分别增加 40.0 倍与 34.4 倍。由于其在测定动力学分析所需反应速率时简便精确，该底物相比常用的 HPLC 或电泳法检测逆转录病毒 PR 切割多肽底物具有诸多优势。吸收 / 发射 = 340 nm/490 nm。

DABCYL-GABA-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-EDANS is also called HIV protease substrate I in some literature. It is widely used for the continuous assay for HIV protease activity. The 11-kD protease (PR) encoded by the human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) is essential for the correct processing of viral polyproteins and the maturation of infectious virus, and is therefore a target for the design of selective acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) therapeutics. The FRET-based fluorogenic substrate is derived from a natural processing site for HIV-1 PR. Incubation of recombinant HIV-1 PR with the fluorogenic substrate resulted in specific cleavage at the Tyr-Pro bond and a time-dependent increase in fluorescence intensity that is linearly related to the extent of substrate hydrolysis. The fluorescence quantum yields of the HIV-1 PR substrate in the FRET assay increased by 40.0- and 34.4-fold, respectively, per mole of substrate cleaved. Because of its simplicity and precision in the determination of reaction rates required for kinetic analysis, this substrate offers many advantages over the commonly used HPLC or electrophoresis-based assays for peptide substrate hydrolysis by retroviral PRs. Abs/Em = 340nm/490nm.

DABCYL标记说明

4-(4-二甲氨基苯基偶氮)苯甲酰基（Dabcyl）是一种发色团，常与荧光团（如EDANS）结合用作猝灭剂。Dabcyl/EDANS FRET（荧光共振能量转移）对的福斯特半径为3.3纳米。

4-(4-Dimethylaminophenylazo)benzoyl (Dabcyl) is a chromophor often used as a quencher in conjunction with a fluorophore (e.g., EDANS). Dabcyl/EDANS FRET pair have a Forster radius of 3.3 nm.

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5-[(2-Aminoethyl)amino]naphthalene-1-sulfonyl (EDANS) is fluorophor with an excitation at 340 nm ▉ and emission of 490 nm ▉. EDANS is often paired together with acceptors like dabcyl for FRET experiements.
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多肽DABCYL-Gaba-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-EDANS的合成步骤：

1、合成CTC树脂：称取2.25g CTC Resin（如初始取代度约为0.43mmol/g）和1.16mmol Fmoc-Gln(Trt)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入2.9mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到  Fmoc-Gln(Trt)-CTC Resin。结构图如下：

2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Gln(Trt)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取2.9mmol Fmoc-Val-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入5.8mmol DIPEA，2.76mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Val-Gln(Trt)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

H2N-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

H2N-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

H2N-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

H2N-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

H2N-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

H2N-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

Fmoc-Gaba-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Gaba-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin，结构如下：

5、4-二甲胺偶氮苯-4’-羧酸(DABCYL)反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入2.9mmol4-二甲胺偶氮苯-4’-羧酸(DABCYL)到树脂中，再加入5.8mmol DIPEA，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到DABCYL-Gaba-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin。 结构如下：

6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 DABCYL-Gaba-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-CTC Resin。 在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出 多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。DABCYL-Gaba-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-COOH的结构图如下。

7、5-(2-氨基乙氨基)-1-萘磺酸反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入2.9mmol 5-(2-氨基乙氨基)-1-萘磺酸到树脂中，再加入5.8mmol DIPEA、2.76mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 DABCYL-Gaba-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Tyr(tBu)-Pro-Ile-Val-Gln(Trt)-EDANS。 结构如下：

8、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品DABCYL-Gaba-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-EDANS。结构图见产品结构图。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

9、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

10、最后总结：

杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽

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