400-998-5282
专注多肽 服务科研
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专注多肽 服务科研
| 编号: | 129791 |
| 中文名称: | 肽基脯氨酰异构酶底物：Suc-AEPF-对硝基苯胺 |
| 英文名: | Peptidyl-Prolyl Isomerase SubstratesSuc-Ala-Glu-Pr |
| CAS号: | 128802-76-6 |
| 单字母: | Suc-AEPF-pNA |
| 三字母: | Suc N端琥珀酰化，琥珀酰基是一种极性的N端修饰，对应于脱氨基天冬氨酸（deamino-Asp），常被掺入羧肽酶底物中。 -Ala丙氨酸：alanine。L-丙氨酸的系统命名为(2S)-氨基丙酸，是编码氨基酸，也叫L-α-丙氨酸。符号：A，Ala。D-丙氨酸存在于多种细菌细胞壁的糖肽中。β-丙氨酸是维生素泛酸和辅酶A的组分。 -GluL-谷氨酸：glutamic acid。系统命名为(2S)-氨基-戊二酸。是编码氨基酸。符号：E，Glu。D-谷氨酸存在于多种细菌的细胞壁和某些细菌杆菌肽中。 -ProL-脯氨酸：proline。系统命名为吡咯烷-(2S)-羧酸。为亚氨基酸。是编码氨基酸。在肽链中有特殊作用，如易形成顺式的肽键等。符号：P，Pro。 -PheL-苯丙氨酸：phenylalanine。系统命名为(2S)-氨基-3-苯基丙酸。是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：F，Phe。 -pNA对硝基苯胺 |
| 氨基酸个数: | 4 |
| 分子式: | C32H38O11N6 |
| 平均分子量: | 682.68 |
| 精确分子量: | 682.26 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | -1 |
| 平均亲水性: | - |
| 疏水性值: | -0.13 |
| 消光系数: | - |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 盐体系: | 可选TFA、HAc、HCl或其它 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | pNA修饰肽 Suc修饰肽 |
Suc-AEPF-pNA, chromogenic substrate for the peptidylprolyl isomerase Pin1.
Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA is a peptide that is a specific interaction with neutrophils. It is an endogenous factor that has been shown to activate neutrophil functions, such as chemotaxis and phagocytosis. The substrate proteins of this peptide are involved in the regulation of neutrophil functions. Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA has also been shown to inhibit the activity of phosphatases, which may lead to inhibition of cell proliferation. The structure activity relationship studies for this peptide show that it can be used as an inhibitor for cells in early stages of development.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1021/jm200156c | Discovery and characterization of a nonphosphorylated cyclic peptide inhibitor of the peptidylprolyl isomerase, Pin1 | 下载 |
| 10.1074/jbc.M412172200 | Vanishingly low levels of Ess1 prolyl-isomerase activity are sufficient for growth in Saccharomyces cerevisiae | 下载 |
| 10.1016/j.neurobiolaging.2005.05.005 | Oxidative modification and down-regulation of Pin1 in Alzheimer's disease hippocampus: A redox proteomics analysis | 下载 |
| 10.1074/jbc.M507760200 | The protein phosphatase 2A phosphatase activator is a novel peptidyl-prolyl cis/trans-isomerase | 下载 |
| 10.1016/j.nbd.2005.11.002 | Redox proteomics identification of oxidatively modified hippocampal proteins in mild cognitive impairment: insights into the development of Alzheimer's disease | 下载 |
| 10.1515/znc-2006-5-623 | Catalytic efficiencies of alkaline proteinases from microorganisms | 下载 |
| 10.1021/bi0608820 | Thermodynamics of phosphopeptide binding to the human peptidyl prolyl cis/trans isomerase Pin1 | 下载 |
| 10.4049/jimmunol.177.10.6999 | The peptidyl-prolyl isomerase Pin1 regulates granulocyte-macrophage colony-stimulating factor mRNA stability in T lymphocytes | 下载 |
| 10.1016/j.jmb.2007.01.049 | Structure and dynamics of pin1 during catalysis by NMR | 下载 |
| 10.1016/j.bbrc.2007.05.124 | Identification and characterization of a novel and functional murine Pin1 isoform | 下载 |
| 10.1186/1472-6807-9-17 | Solution structure of the parvulin-type PPIase domain of Staphylococcus aureus PrsA--implications for the catalytic mechanism of parvulins | 下载 |
| 10.1021/bi9014242 | A library of fluorescent peptides for exploring the substrate specificities of prolyl isomerases | 下载 |
| 10.1016/j.bbamcr.2010.05.006 | Identification of an atypical peptidyl-prolyl cis/trans isomerase from trypanosomatids | 下载 |
| 10.1271/bbb.100372 | Preparation of protein transduction domain-fused peptidyl prolyl cis/trans isomerase Pin1 | 下载 |
| 10.1016/s0014-5793(97)00345-1 | Comparative mutational analysis of peptidyl prolyl cis/trans isomerases: active sites of Escherichia coli trigger factor and human FKBP12 | 下载 |
| 10.1016/s0092-8674(00)80273-1 | Structural and functional analysis of the mitotic rotamase Pin1 suggests substrate recognition is phosphorylation dependent | 下载 |
多肽Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取2.92g CTC Resin（如初始取代度约为0.52mmol/g）和1.82mmol Fmoc-Phe-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入4.56mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Phe-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Phe-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取4.56mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入9.11mmol DIPEA，4.33mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Pro-Phe-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Pro-Phe-CTC Resin
H2N-Glu(OtBu)-Pro-Phe-CTC Resin
Fmoc-Ala-Glu(OtBu)-Pro-Phe-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Ala-Glu(OtBu)-Pro-Phe-CTC Resin，结构如下：
5、丁二酸反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入4.56mmol丁二酸到树脂中，再加入9.11mmol DIPEA，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Suc-Ala-Glu(OtBu)-Pro-Phe-CTC Resin。 结构如下：
6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 Suc-Ala-Glu(OtBu)-Pro-Phe-CTC Resin。 在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出 多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。Suc-Ala-Glu(OtBu)-Pro-Phe-COOH的结构图如下。
7、4-硝基苯胺反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入4.56mmol 4-硝基苯胺到树脂中，再加入9.11mmol DIPEA、4.33mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 Suc-Ala-Glu(OtBu)-Pro-Phe-pNA。 结构如下：
8、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Suc-Ala-Glu-Pro-Phe-pNA。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
9、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
10、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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