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Peptide Ac-Arg-Leu-Arg-MCA is a Research Peptide with significant interest within the field academic and medical research. Recent citations using Ac-Arg-Leu-Arg-MCA include the following: Collagen-like polypeptide poly (Pro-Hyp-Gly) conjugated with Gly-Arg-Gly-Asp-Ser and Pro-His-Ser-Arg-Asn peptides enhances cell adhesion, migration, and Y Shibasaki, S Hirohara , K Terada, T Ando - Peptide , 2011 - Wiley Online Libraryhttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/bip.21551 Synthesis, nano-scale assembly, and in vivo anti-thrombotic activity of novel short peptides containing L-Arg and L-Asp or L-Glu Y Chen, G Cui, M Zhao, C Wang, K Qian - Bioorganic & medicinal , 2008 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0968089608003921 Possible existence of common internalization mechanisms among arginine-rich peptides T Suzuki, S Futaki, M Niwa, S Tanaka, K Ueda - Journal of Biological , 2002 - ASBMBhttps://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)87688-1/abstract Selective cytotoxicity following Arg-to-Lys substitution in tritrpticin adopting a unique amphipathic turn structure ST Yang, SY Shin, CW Lee, YC Kim , KS Hahm, JI Kim - FEBS letters, 2003 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014579303002667 Relevance of the C-terminal Arg-Phe sequence in γ2-melanocyte-stimulating hormone (γ2-MSH) for inducing cardiovascular effects in conscious rats M Nijsen, GJW De Ruiter - British journal of , 2000 - Wiley Online Libraryhttps://bpspubs.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1038/sj.bjp.0703709 Improving the activity of Trp-rich antimicrobial peptides by Arg/Lys substitutions and changing the length of cationic residues M Arias , KB Piga, ME Hyndman, HJ Vogel - Biomolecules, 2018 - mdpi.comhttps://www.mdpi.com/2218-273X/8/2/19 Research progress of radiolabeled Asn-Gly-Arg (NGR) peptides for imaging and therapy L Zhu, Z Ding, X Li, H Wei, Y Chen - Molecular Imaging, 2020 - journals.sagepub.comhttps://journals.sagepub.com/doi/abs/10.1177/1536012120934957 Substitution of Gly with Ala enhanced the melanoma uptake of technetium-99m-labeled Arg-Ala-Asp-conjugated alpha-melanocyte stimulating hormone peptide J Yang, Y Miao - Bioorganic & medicinal chemistry letters, 2012 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960894X12000169 resulting in improved melanoma uptake and reduced renal uptake of Tc-99m-labeled Arg-Gly-Asp-conjugated alpha-melanocyte stimulating hormone hybrid peptide J Yang, H Guo , RS Padilla, M Berwick - Bioorganic & medicinal , 2010 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S096808961000725X Dual receptor-targeting 99mTc-labeled Arg-Gly-Asp-conjugated Alpha-Melanocyte stimulating hormone hybrid peptides for human melanoma imaging J Xu , J Yang, Y Miao - Nuclear medicine and biology, 2015 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0969805114005356 Highly active antibacterial ferrocenoylated or ruthenocenoylated Arg-Trp peptides can be discovered by an L-to-D substitution scan HB Albada , P Prochnow, S Bobersky , JE Bandow - Chemical , 2014 - pubs.rsc.orghttps://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2014/sc/c4sc01822b A bioconjugate of Lys and Arg mimics biological activity of the Arg-Gly-Asp peptide sequence G Ehteshami, DC Brune, JC Lopez, SP Massia - Acta Biomaterialia, 2005 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1742706104000108 Evaluation of new Tc-99m-labeled Arg-X-Asp-conjugated alpha-melanocyte stimulating hormone peptides for melanoma imaging AM Flook, J Yang, Y Miao - Molecular pharmaceutics, 2013 - ACS Publicationshttps://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/mp400248f Linker Dramatically Decreased the Renal Uptake of 99mTc-Labeled Arg-X-Asp-Conjugated and X-Ala-Asp-Conjugated alpha-Melanocyte Stimulating Hormone Peptides AM Flook, J Yang, Y Miao - Journal of medicinal chemistry, 2014 - ACS Publicationshttps://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jm501114v Effects of amino acids on melanoma targeting and clearance properties of Tc-99m-labeled Arg-X-Asp-conjugated alpha-melanocyte stimulating hormone peptides AM Flook, J Yang, Y Miao - Journal of medicinal chemistry, 2013 - ACS Publicationshttps://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jm4012356

Fluorogenic substrate peptide to assay trypsin-like activity. In its intact state this peptide is non-fluorescent, however when aminomethylcoumarin (AMC) is released upon hydrolysation, fluorescence can be detected. This peptide is therefore a useful tool for analysing trypsin-like enzyme activity.AMC is a fluorescent dye with excitation maxima at around 360 nm and emission maxima at around 450 nm. AMC can be excited with a mercury lamp and observed using a UV filter set.

Ac-Arg-Leu-Arg-AMC trifluoroacetate salt is a mitochondrial biogenesis activator that has been shown to increase the levels of proteins in the mitochondria. These proteins are required for mitochondrial membrane potential, ATP production, and protein homeostasis. Ac-Arg-Leu-Arg-AMC trifluoroacetate salt has been shown to increase the number of pluripotency markers in human liver cells and to reduce insulin resistance in animals. The drug also increases the expression of ubiquitin ligases and proteasomes, which are enzymes that degrade damaged proteins. Ac-Arg-Leu-Arg-AMC trifluoroacetate salt may be used for treating liver diseases or disorders as well as obesity.

Ac-Arg-Leu-Arg-MCA is a fluorogenic substrate for the proteasome that can be used in proteasome research. Ac-Arg-Leu-Arg-MCA has been shown to be a useful fluorescent substrate for the ubiquitin proteasome system substrates and peptides and biochemicals. It is also an Enzyme Substrate of the Peptides & Biochemicals section.

多肽AMC标记：定义、原理、应用及注意事项全解析

多肽AMC标记，全称多肽7-氨基-4-甲基香豆素标记（Peptide 7-Amino-4-Methylcoumarin Labeling），是一种将荧光分子“AMC”通过特异性共价键连接到多肽特定位点的修饰技术。其核心价值在于为多肽赋予可追踪、可定量的荧光特性，使其成为兼具生物活性与检测功能的“荧光探针”，广泛应用于生物医学科研、酶学分析及药物筛选等领域。

一、核心组件：AMC分子的核心特性

AMC（7-氨基-4-甲基香豆素）是该标记技术的核心荧光基团，其独特的化学与光学特性决定了标记效果，核心优势包括：

1. 光学性能稳定：激发波长约340-360 nm，发射波长约440-460 nm，荧光量子产率高，光漂白抗性强，且背景荧光低，能有效提升检测灵敏度；

2. 反应活性适配：AMC常以“活性酯衍生物”形式（如AMC-NHS酯、AMC-COOH）存在，可与多肽分子末端（N端/C端）或侧链（如赖氨酸的ε-氨基、天冬氨酸/谷氨酸的羧基）发生酰胺化反应，形成稳定的共价键，且对多肽的空间结构破坏极小；

3. 水溶性适配：AMC分子兼具一定的亲水性与疏水性，标记后不会显著改变多肽的溶解特性，适配后续水性体系的生物实验。

二、标记原理与核心流程

多肽AMC标记的核心是“特异性共价偶联”，需在温和条件下进行以保障多肽生物活性，典型流程如下：

1. 多肽预处理：先通过高效液相色谱（HPLC）等技术纯化目标多肽，去除杂质；同时确认多肽的活性位点（如受体结合位点、酶切位点），避开这些位点选择标记位点（常用N端氨基或C端羧基）；

2. AMC活性酯制备：将AMC与活化试剂（如NHS、DCC）反应，生成高活性的AMC-NHS酯（减少AMC自身聚合，提升与多肽的反应效率）；

3. 偶联反应：在缓冲体系（如PBS缓冲液，pH 7.0-8.0）中混合多肽与AMC活性酯，控制反应温度（25℃或4℃）与时间（2-4小时），让AMC活性酯的活性基团与多肽的氨基/羧基发生酰胺化反应，形成稳定的标记产物；

4. 纯化与验证：通过HPLC分离未反应的游离AMC、活化试剂及副产物，收集高纯度的AMC标记多肽；再通过质谱（确认分子量是否符合标记后理论值）、荧光光谱（验证荧光信号强度）进行质控，确保标记成功且多肽活性未受影响。

三、核心应用场景

AMC标记的核心优势的是“标记后多肽保留生物活性，荧光信号可实时定量检测”，因此主要应用于以下场景：

1. 蛋白酶活性检测（最核心应用）：将AMC标记在多肽底物的蛋白酶特异性识别序列末端，当蛋白酶切割多肽时，AMC基团被释放（游离AMC的荧光强度远高于结合态），通过检测荧光强度的变化速率，可定量分析蛋白酶的活性（如基质金属蛋白酶MMPs、胰蛋白酶、 caspases等的活性检测）；

2. 受体-配体结合分析：用AMC标记多肽配体，与细胞表面或纯化的受体孵育后，通过荧光成像可追踪配体与受体的结合过程，通过荧光强度定量结合亲和力（Kd值）；

3. 药物筛选：针对特定蛋白酶或受体的药物候选分子，以AMC标记多肽为探针，通过荧光信号的变化（如酶活性被抑制时荧光释放减少），高通量筛选药物的抑制/激活活性，评估药物 potency；

4. 多肽体内/体外追踪：AMC标记的多肽进入细胞或生物体内后，可通过荧光显微镜、小动物活体成像系统等设备，实时观察多肽的分布、转运及代谢过程，为多肽药物的药代动力学研究提供支撑。

四、关键注意事项

1. 标记位点选择：必须避开多肽的生物活性中心（如酶切位点、受体结合位点），否则会导致多肽失去原有功能；若多肽含多个氨基/羧基，可通过控制反应摩尔比、pH值实现特异性单点标记；

2. 反应条件控制：缓冲液pH需严格控制在7.0-8.0（过酸会抑制酰胺化反应，过碱会导致AMC活性酯水解失效）；低温反应（4℃）可减少多肽降解，适合不稳定多肽的标记；

3. 杂质去除：游离AMC会导致背景荧光偏高，影响检测准确性，因此标记后需通过HPLC彻底纯化，确保标记多肽纯度≥95%（科研级）或≥98%（药物研发级）；

4. 多肽稳定性保护：若多肽含半胱氨酸（Cys），需在反应体系中添加少量还原剂（如DTT），避免Cys侧链巯基氧化形成二硫键，影响多肽结构与标记效率；

5. 荧光检测条件匹配：检测时需根据AMC的光学特性调整激发/发射波长，避免与实验体系中其他荧光物质（如细胞自身荧光、染料）的光谱重叠，减少干扰。

五、AMC与AFC标记的核心区别（补充说明）

此前你关注过多肽AFC标记，两者核心差异在于荧光基团的结构与性能，具体对比如下：AMC含“甲基（-CH₃）”，AFC含“三氟甲基（-CF₃）”；AFC的背景荧光更低、光稳定性更强，但合成成本更高；AMC性价比更高，荧光信号强度足够满足多数科研需求，是更常用的基础荧光标记基团。

Ac-RLR-AMC, fluorogenic substrate for assaying the trypsin-like activity of purified proteasomes (Km = 78 μM).

多肽Ac-Arg-Leu-Arg-AMC的合成步骤：

1、合成CTC树脂：称取2.87g CTC Resin（如初始取代度约为0.86mmol/g）和2.96mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入7.4mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到  Fmoc-Arg(Pbf)-CTC Resin。结构图如下：

2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Arg(Pbf)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取7.4mmol Fmoc-Leu-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入14.81mmol DIPEA，7.03mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Leu-Arg(Pbf)-CTC Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Leu-Arg(Pbf)-CTC Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Arg(Pbf)-Leu-Arg(Pbf)-CTC Resin，结构如下：

5、乙酸酐反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入7.4mmol 乙酸酐到树脂中，再加入14.81mmol DIPEA、7.03mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Ac-Arg(Pbf)-Leu-Arg(Pbf)-CTC Resin。 结构如下：

6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 Ac-Arg(Pbf)-Leu-Arg(Pbf)-CTC Resin。 在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出 多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。Ac-Arg(Pbf)-Leu-Arg(Pbf)-COOH的结构图如下。

7、7-氨基-4-甲基香豆素反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入7.4mmol 7-氨基-4-甲基香豆素到树脂中，再加入14.81mmol DIPEA、7.03mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 Ac-Arg(Pbf)-Leu-Arg(Pbf)-AMC。 结构如下：

8、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Ac-Arg-Leu-Arg-AMC。结构图见产品结构图。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

9、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

10、最后总结：

杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽

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