对应于 BRLF1 蛋白的 148-156 位氨基酸。BRLF1 是一种转录激活因子，其直接结合一些 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 裂解基因启动子中的 GC 富集序列。
编号：158222
CAS号：254110-79-7
单字母：H2N-RVRAYTYSK-OH
| 编号: | 158222 |
| 中文名称: | CEF27, Epstein - Barr Virus BRLF - 1 lytic (148 - 156) |
| 英文名: | CEF27, Epstein - Barr Virus BRLF - 1 lytic (148 - 156) |
| 英文同义词: | CEF27, Epstein-Barr Virus BRLF-1 lytic 148-156 |
| CAS号: | 254110-79-7 |
| 单字母: | H2N-RVRAYTYSK-OH |
| 三字母: | H2N N端氨基 -Arg精氨酸 -Val缬氨酸 -Arg精氨酸 -Ala丙氨酸 -Tyr酪氨酸 -Thr苏氨酸 -Tyr酪氨酸 -Ser丝氨酸 -Lys赖氨酸 -OHC端羧基 |
| 氨基酸个数: | 9 |
| 分子式: | C51H82N16O14 |
| 平均分子量: | 1143.3 |
| 精确分子量: | 1142.62 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | 5.97 |
| 平均亲水性: | 0.011111111111111 |
| 疏水性值: | -1.13 |
| 消光系数: | 2980 |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | CEF Control Peptides |
CEF27, Epstein-Barr Virus BRLF-1 lytic 148-156 对应于 BRLF1 蛋白的 148-156 位氨基酸。BRLF1 是一种转录激活因子，其直接结合一些 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 裂解基因启动子中的 GC 富集序列。
CEF27, Epstein-Barr Virus BRLF-1 lytic 148-156 corresponding to amino acids 148-156 of the BRLF1 protein. BRLF1 is a transcriptional activator that binds directly to a GC-rich motif present in some Epstein-Barr virus (EBV) lytic gene promoters.
Definition
The CEF control peptides are 8-12 amino acids in length, with sequences derived from the human Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus and Influenza Virus1 These peptides are used in the stimulation of IFNg release from CD8+ T cells in individuals with defined HLA types1. They are useful as positive control peptides in several cytokine assays such as Elispot.
Discovery
CEF peptides were first selected in 2002 based on their ability to recognize CD8+ T cells1.
Classification
They are derived from epitopes of viruses and hence have antigenic properties1.
Structural Characteristics
CEF peptides are 8-11 amino acids long with sequences: GILGFVFTL (Influenza A, HLA-A2), FMYSDFHFI (Influenza A, HLA-A2), CLGGLLTMV (EBV, HLA-A2), GLCTLVAML (EBV, HLA-A2), NLVPMVATV (HCMV, HLA-A2).
Mode of action
CEF peptides are effective epitopes for CD8+ T cells2. They bind to these cells and trigger the production of IFNg.
Functions
CEF control peptides are used as positive control in Elispot assay that is used to investigate specific immune responses in various diseases including infections, cancer, allergies and autoimmune diseases2. In this case the CEF peptides ensure that the cells under study are active and viable2. Elispot is also useful in the development of vaccines especially for HIV where CEF peptides are used also as controls2.
References
1. Currier JR, Kuta EG, Turk E, Earhart LB, Loomis-Price L, Janetzki S, Ferrari G, Birx DL, Cox JH (2002). A panel of MHC class I restricted viral peptides for use as a quality control for vaccine trial ELISPOT assays, J Immunol Methods, 260, 157-172.
2. Gazagne A, Claret E, Wijdenes J, Yssel H, Bousquet F, Levy E, Vielh P, Scotte F, Goupil T, Fridman WH, Tartour E (2003). A Fluorospot assay to detect single T lymphocytes simultaneously producing multiple cytokines, J Immunol Methods, 283(1-2), 91-98.
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1128/JVI.75.13.6135-6142.2001 | Epstein-Barr virus immediate-early protein BRLF1 induces the lytic form of viral replication through a mechanism involving phosphatidylinositol-3 kinase activation | 下载 |
多肽H2N-Arg-Val-Arg-Ala-Tyr-Thr-Tyr-Ser-Lys-COOH的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.94g CTC Resin（如初始取代度约为0.4mmol/g）和0.93mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入2.33mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Lys(Boc)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Lys(Boc)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取2.33mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入4.66mmol DIPEA，2.21mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
H2N-Val-Arg(Pbf)-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Arg(Pbf)-Val-Arg(Pbf)-Ala-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-CTC Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Arg-Val-Arg-Ala-Tyr-Thr-Tyr-Ser-Lys-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%、TFA：H2O=97.5%：2.5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
以上所有内容，为专肽生物原创内容，请勿发布到其他网站上。
