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多肽产品

218433-98-8,黄体生成素释放激素Biotinyl-(Gln¹)-LHRH,Biotin-Gln-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2,Biotin-QHWSYGLRPG-NH2,杭州专肽生物的产品

黄体生成素释放激素Biotinyl-(Gln¹)-LHRH

这种生物素化的 LHRH 衍生物已用于 LHRH 受体配体结合的功能分析。

编号:200201

CAS号:218433-98-8

单字母:Biotinyl-QHWSYGLRPG-NH2

纠错
  • 编号:200201
    中文名称:黄体生成素释放激素Biotinyl-(Gln¹)-LHRH
    英文名:Biotinyl-(Gln¹)-LHRH
    CAS号:218433-98-8
    单字母:Biotinyl-QHWSYGLRPG-NH2
    三字母:Biotinyl

    N端生物素标记

    -Gln

    谷氨酰胺

    -His

    组氨酸

    -Trp

    色氨酸

    -Ser

    丝氨酸

    -Tyr

    酪氨酸

    -Gly

    甘氨酸

    -Leu

    亮氨酸

    -Arg

    精氨酸

    -Pro

    脯氨酸

    -Gly

    甘氨酸

    -NH2

    C端酰胺化

    氨基酸个数:10
    分子式:C65H92N20O15S1
    平均分子量:1425.62
    精确分子量:1424.68
    等电点(PI):-
    pH=7.0时的净电荷数:2.24
    平均亲水性:-0.8
    疏水性值:-1.24
    消光系数:6990
    来源:人工化学合成,仅限科学研究使用,不得用于人体。
    储存条件:负80℃至负20℃
    标签:生物素标记肽(Biotinyl)    垂体和下丘脑激素   

  • This biotinylated LHRH derivative has been used in a functional analysis of the LHRH receptor ligand binding.

    专肽生物合成用于蛋白质-蛋白质相互作用研究的生物素化肽。尽管生物素可以在 N 端或 C 端引入(通过赖氨酸残基),但我们建议使用 N 端修饰,因为它成本低、成功率高、周转时间短且易于操作。因为多肽合成是从 C 端到 N 端合成的,因此,N 端修饰是 SPPS步骤的最后一步,不需要额外的特定缩合步骤。相比之下,C 端修饰需要额外的步骤,并且通常更复杂。当然,原则上生物素可以定位在任何地方

    生物素可以通过多种不同的接头或间隔物与肽分离。尽管如此,还是建议包含一个灵活的间隔物,例如 Ahx(一个 6 碳接头),以使生物素标签更加稳定或灵活

    专肽生物在 N 端或 C 端提供生物素化:生物素-N 端、赖氨酸-生物素-肽中间和赖氨酸-生物素-C 端。
    专肽生物还可以使用 Ahx 接头或长碳 (LC) 接头提供生物素化:生物素-Ahx-N 末端、Lys-Ahx-生物素-肽中间、Lys-Ahx-生物素-C-末端。

    (生物素结构)

    示例:
    GRGDS在N端和C端标记生物素的结构展示。

    1、GRGDS在N端标记生物素,不增加Ahx 接头

    2、GRGDS在N端标记生物素,增加一个Ahx 接头


    3、GRGDS在C端标记生物素,不增加Ahx 接头

    4、GRGDS在C端标记生物素,增加一个Ahx 接头。

  • DOI名称
    10.1100/tsw.2010.73Human islet amyloid polypeptide fibril binding to catalase: a transmission electron microscopy and microplate study下载
    10.1016/s0303-7207(98)00160-9Functional analysis of GnRH receptor ligand binding using biotinylated GnRH derivatives下载
  • 多肽Biotin-Gln-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2的合成步骤:

    1、合成MBHA树脂:取若干克MBHA树脂(如初始取代度为0.5mmol/g)和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中,加入DMF,搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA,搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU,搅拌混合均匀。反应3-4小时后,用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次,甲醇洗涤2次,DCM洗涤2次,再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上,得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin},测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图:

    2、脱Fmoc:取2.18g的上述树脂,用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:

    3、缩合:取1.96mmol Fmoc-Gly-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入3.92mmol DIPEA,1.86mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Gly-Linker-MBHA Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:

    4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到

    H2N-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    H2N-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Gln(Trt)-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin

    以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。

    最后再经过步骤二得到 H2N-Gln(Trt)-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHA Resin,结构如下:

    5、生物素反应连接:在上述树脂中,加入适当DMF后,再加入1.96mmol 生物素到树脂中,再加入3.92mmol DIPEA、1.86mmol HBTU,鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。 得到Biotin-Gln(Trt)-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Linker-MBHAResin。 结构如下:

     

    5、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品Biotin-Gln-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。结构图见产品结构图。

    切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%

    2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%

    3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%

    (前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)

    6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

    7、最后总结:

    杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽

    以上所有内容,为专肽生物原创内容,请勿发布到其他网站上。

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