VKGILS-NH2 是一种 SLIGKV-NH2 (蛋白酶激活的受体 2 (PAR2) 的激动剂) 的反向氨基酸序列对照肽，对细胞中的 DNA 合成没有影响。
编号：200287
CAS号：942413-05-0/2828432-41-1/2763585-10-8
单字母：H2N-VKGILS-NH2
| 编号: | 200287 |
| 中文名称: | PAR-2 (6-1) amide (human) |
| 英文名: | PAR-2 (6-1) amide (human) |
| CAS号: | 942413-05-0，free base 2828432-41-1，TFA盐 2763585-10-8，醋酸盐 |
| 单字母: | H2N-VKGILS-NH2 |
| 三字母: | H2N N端氨基 -Val缬氨酸 -Lys赖氨酸 -Gly甘氨酸 -Ile异亮氨酸 -Leu亮氨酸 -Ser丝氨酸 -NH2C端酰胺化 |
| 氨基酸个数: | 6 |
| 分子式: | C28H54N8O7 |
| 平均分子量: | 614.78 |
| 精确分子量: | 614.41 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | 1.97 |
| 平均亲水性: | -0.36 |
| 疏水性值: | 1.23 |
| 消光系数: | - |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | 激动剂多肽(Agonist Peptide) 血液学 |
VKGILS-NH2 是一种 SLIGKV-NH2 (蛋白酶激活的受体 2 (PAR2) 的激动剂) 的反向氨基酸序列对照肽，对细胞中的 DNA 合成没有影响。
VKGILS-NH2 is a reversed amino acid sequence control peptide for SLIGKV-NH2 (protease-activated receptor 2 (PAR2) agonist). VKGILS-NH2 has no effect on DNA synthesis in cells.
VKGILS-NH2是蛋白酶激活受体2（PAR2）激动剂SLIGKV-NH2的反向氨基酸序列对照肽。PARs是一组存在于几种细胞类型中的G蛋白偶联受体。目前，包括PAR1到4在内的四种PAR成员已被识别、克隆及指定。PAR2在呼吸道和胃肠道表达。PAR2活化与各种细胞和组织内的炎症反应密切相关。经鉴定，PAR2可诱导蛋白酶激活，因此导致全身性低血压。
体外实验：将PAR2激活肽AP(SLIGKV-NH2)和反向对照肽RP(VKGILS-NH2)用于一项研究，以揭示PAR2是通过人体内支气管上皮细胞，轻度增强粘蛋白分泌。根据这项研究，与VKGILS-NH2处理的细胞相比，细胞暴露于合成的100和1000 M浓度的PAR2激动肽(SLIGKV-NH2)30分钟可导致粘蛋白分泌微弱但统计上显着的增加。
体内实验：在一项体内研究中，将在最高浓度不会引起收缩反应的小鼠PAR2反向(LRGILS-NH2)和人类PAR2反向(VKGILS-NH2)肽作为对照，以验证在豚鼠胆囊中，PAR1和PAR2活化可引起收缩反应。
临床试验：合成PAR2激活肽SLIGKV-NH2及其反向序列对照肽VKGILS-NH2，以验证人体内PAR2活化可引发血管舒张的假设。该项研究结果表明，在前臂阻力血管中，SLIGKV-NH2引发剂量依赖性扩张，而VKGILS-NH2没有显著效果。
M Tognetto, et al. Evidence That PAR-1 and PAR-2 Mediate Prostanoid-Dependent Contraction in Isolated Guinea-Pig Gallbladder. Br J Pharmacol. 2000 Oct;131(4):689-94. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11030717
David A Vesey, et al. Proinflammatory and Proliferative Responses of Human Proximal Tubule Cells to PAR-2 Activation. Am J Physiol Renal Physiol. 2007 Nov;293(5):F1441-9. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17699557
多肽H2N-Val-Lys-Gly-Ile-Leu-Ser-NH2的合成步骤：
1、合成MBHA树脂：取若干克的MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：
2、脱Fmoc：取1.4g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取1.26mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入2.52mmol DIPEA，1.2mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
H2N-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
H2N-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Val-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Val-Lys(Boc)-Gly-Ile-Leu-Ser(tBu)-Linker-MBHA Resin，结构如下：
5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Val-Lys-Gly-Ile-Leu-Ser-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽
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