400-998-5282
专注多肽 服务科研
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荧光底物 pERTKR-AMC 被弗林蛋白酶有效切割，弗林蛋白酶是酵母 Kex2 内切蛋白酶的哺乳动物同源物（kcat/Km 约 2·10⁴ M-¹s-¹）。作为与高尔基体膜相关的钙依赖性丝氨酸蛋白酶，弗林蛋白酶负责前体蛋白在配对碱性残基处的分泌加工。也被前蛋白转化酶 4 切割。Pyr-RTKR-AMC 是黄病毒素的极好底物。
编号：200337
CAS号：155575-02-3
单字母：Pyr-RTKR-AMC
| 编号: | 200337 |
| 中文名称: | pGlu-Arg-Thr-Lys-Arg-AMC |
| CAS号: | 155575-02-3 |
| 单字母: | Pyr-RTKR-AMC |
| 三字母: | Pyr 焦谷氨酸（Glp、pGlu、Pyr）是一种在蛋白质N端位置发现的蛋白质生成氨基酸。它是由N端谷氨酸残基环化形成内酰胺而产生的。 -ArgL-精氨酸：arginine。系统命名为(2S)-氨基-5-胍基戊酸。在生理条件下带正电荷，为编码氨基酸。是幼小哺乳动物的必需氨基酸。符号：R，Arg。 -ThrL-苏氨酸：threonine。系统命名为(2S)-氨基-(3R)-羟基丁酸。有两个手性中心，是编码氨基酸。是哺乳动物的必需氨基酸。符号：T，Thr。 -LysL-赖氨酸：lysine。系统命名为(2S)-6-二氨基已酸。是编码氨基酸中的碱性氨基酸，哺乳动物的必需氨基酸。在蛋白质中的赖氨酸可以被修饰为多种形式的衍生物。符号：K，Lys。 -ArgL-精氨酸：arginine。系统命名为(2S)-氨基-5-胍基戊酸。在生理条件下带正电荷，为编码氨基酸。是幼小哺乳动物的必需氨基酸。符号：R，Arg。 -AMC7-氨基-4-甲基香豆素（AMC或Amc）是一种荧光染料，其激发波长为350纳米，发射波长为450纳米。 |
| 氨基酸个数: | 4 |
| 分子式: | C37H57N13O9 |
| 平均分子量: | 827.93 |
| 精确分子量: | 827.44 |
| 等电点(PI): | - |
| pH=7.0时的净电荷数: | 3 |
| 平均亲水性: | 2.15 |
| 疏水性值: | -3.4 |
| 消光系数: | - |
| 来源: | 人工化学合成，仅限科学研究使用，不得用于人体。 |
| 储存条件: | 负80℃至负20℃ |
| 标签: | AMC修饰肽 |
The fluorogenic substrate pERTKR-AMC is efficiently cleaved by furin, a mammalian homolog of the yeast Kex2 endoprotease (kcat/Km approx. 2·10⁴ M-¹s-¹). As a calcium-dependent serine protease associated with Golgi membranes, furin is responsible for the secretory processing of precursor proteins at paired basic residues. Also cleaved by proprotein convertase 4. Pyr-RTKR-AMC is an excellent substrate for flavivirin.
MCA conjugated molecule targeting furin
多肽AMC标记，全称多肽7-氨基-4-甲基香豆素标记（Peptide 7-Amino-4-Methylcoumarin Labeling），是一种将荧光分子“AMC”通过特异性共价键连接到多肽特定位点的修饰技术。其核心价值在于为多肽赋予可追踪、可定量的荧光特性，使其成为兼具生物活性与检测功能的“荧光探针”，广泛应用于生物医学科研、酶学分析及药物筛选等领域。
AMC（7-氨基-4-甲基香豆素）是该标记技术的核心荧光基团，其独特的化学与光学特性决定了标记效果，核心优势包括：
光学性能稳定：激发波长约340-360 nm，发射波长约440-460 nm，荧光量子产率高，光漂白抗性强，且背景荧光低，能有效提升检测灵敏度；
反应活性适配：AMC常以“活性酯衍生物”形式（如AMC-NHS酯、AMC-COOH）存在，可与多肽分子末端（N端/C端）或侧链（如赖氨酸的ε-氨基、天冬氨酸/谷氨酸的羧基）发生酰胺化反应，形成稳定的共价键，且对多肽的空间结构破坏极小；
水溶性适配：AMC分子兼具一定的亲水性与疏水性，标记后不会显著改变多肽的溶解特性，适配后续水性体系的生物实验。
多肽AMC标记的核心是“特异性共价偶联”，需在温和条件下进行以保障多肽生物活性，典型流程如下：
多肽预处理：先通过高效液相色谱（HPLC）等技术纯化目标多肽，去除杂质；同时确认多肽的活性位点（如受体结合位点、酶切位点），避开这些位点选择标记位点（常用N端氨基或C端羧基）；
AMC活性酯制备：将AMC与活化试剂（如NHS、DCC）反应，生成高活性的AMC-NHS酯（减少AMC自身聚合，提升与多肽的反应效率）；
偶联反应：在缓冲体系（如PBS缓冲液，pH 7.0-8.0）中混合多肽与AMC活性酯，控制反应温度（25℃或4℃）与时间（2-4小时），让AMC活性酯的活性基团与多肽的氨基/羧基发生酰胺化反应，形成稳定的标记产物；
纯化与验证：通过HPLC分离未反应的游离AMC、活化试剂及副产物，收集高纯度的AMC标记多肽；再通过质谱（确认分子量是否符合标记后理论值）、荧光光谱（验证荧光信号强度）进行质控，确保标记成功且多肽活性未受影响。
AMC标记的核心优势的是“标记后多肽保留生物活性，荧光信号可实时定量检测”，因此主要应用于以下场景：
蛋白酶活性检测（最核心应用）：将AMC标记在多肽底物的蛋白酶特异性识别序列末端，当蛋白酶切割多肽时，AMC基团被释放（游离AMC的荧光强度远高于结合态），通过检测荧光强度的变化速率，可定量分析蛋白酶的活性（如基质金属蛋白酶MMPs、胰蛋白酶、 caspases等的活性检测）；
受体-配体结合分析：用AMC标记多肽配体，与细胞表面或纯化的受体孵育后，通过荧光成像可追踪配体与受体的结合过程，通过荧光强度定量结合亲和力（Kd值）；
药物筛选：针对特定蛋白酶或受体的药物候选分子，以AMC标记多肽为探针，通过荧光信号的变化（如酶活性被抑制时荧光释放减少），高通量筛选药物的抑制/激活活性，评估药物 potency；
多肽体内/体外追踪：AMC标记的多肽进入细胞或生物体内后，可通过荧光显微镜、小动物活体成像系统等设备，实时观察多肽的分布、转运及代谢过程，为多肽药物的药代动力学研究提供支撑。
标记位点选择：必须避开多肽的生物活性中心（如酶切位点、受体结合位点），否则会导致多肽失去原有功能；若多肽含多个氨基/羧基，可通过控制反应摩尔比、pH值实现特异性单点标记；
反应条件控制：缓冲液pH需严格控制在7.0-8.0（过酸会抑制酰胺化反应，过碱会导致AMC活性酯水解失效）；低温反应（4℃）可减少多肽降解，适合不稳定多肽的标记；
杂质去除：游离AMC会导致背景荧光偏高，影响检测准确性，因此标记后需通过HPLC彻底纯化，确保标记多肽纯度≥95%（科研级）或≥98%（药物研发级）；
多肽稳定性保护：若多肽含半胱氨酸（Cys），需在反应体系中添加少量还原剂（如DTT），避免Cys侧链巯基氧化形成二硫键，影响多肽结构与标记效率；
荧光检测条件匹配：检测时需根据AMC的光学特性调整激发/发射波长，避免与实验体系中其他荧光物质（如细胞自身荧光、染料）的光谱重叠，减少干扰。
此前你关注过多肽AFC标记，两者核心差异在于荧光基团的结构与性能，具体对比如下：AMC含“甲基（-CH₃）”，AFC含“三氟甲基（-CF₃）”；AFC的背景荧光更低、光稳定性更强，但合成成本更高；AMC性价比更高，荧光信号强度足够满足多数科研需求，是更常用的基础荧光标记基团。
| DOI | 名称 | |
|---|---|---|
| 10.1016/j.pep.2008.03.013 | Recombinant proprotein convertase 4 (PC4) from Leishmania tarentolae expression system: purification, biochemical study and inhibitor design | 下载 |
| 10.1074/jbc.M313852200 | Serpin mechanism of hepatitis C virus nonstructural 3 (NS3) protease inhibition: induced fit as a mechanism for narrow specificity | 下载 |
| 10.1016/s0014-5793(03)01393-0 | Two engineered eglin c mutants potently and selectively inhibiting kexin or furin | 下载 |
| 10.1002/jcp.10454 | Latent TGF-beta1 activation by platelets | 下载 |
| 10.1128/JVI.02719-06 | Switching the substrate specificity of the two-component NS2B-NS3 flavivirus proteinase by structure-based mutagenesis | 下载 |
| 10.1016/j.febslet.2010.05.062 | Biochemical characterisation of Murray Valley encephalitis virus proteinase | 下载 |
| 10.1007/978-1-61779-204-5_18 | A proteomic protocol to identify physiological substrates of pro-protein convertases | 下载 |
| 10.1515/BC.2011.100 | Purification of the proprotein convertase furin by affinity chromatography based on PC-specific inhibitors | 下载 |
| 10.1016/j.contraception.2011.10.004 | Inhibition of proprotein convertase 5/6 activity: potential for nonhormonal women-centered contraception | 下载 |
| 10.1016/j.bbrc.2012.02.111 | Proprotein convertases in post-menopausal endometrial cancer: distinctive regulation and non-invasive diagnosis | 下载 |
| 10.1074/jbc.M111.332643 | Highly potent inhibitors of proprotein convertase furin as potential drugs for treatment of infectious diseases | 下载 |
| 10.1016/j.bbamcr.2013.04.002 | Curcumin affects proprotein convertase activity: elucidation of the molecular and subcellular mechanism | 下载 |
| 10.1021/jm401457n | Design, synthesis, and structure-activity relationship studies of a potent PACE4 inhibitor | 下载 |
| 10.1093/eurheartj/ehu314 | Post-translational modifications enhance NT-proBNP and BNP production in acute decompensated heart failure | 下载 |
| 10.1016/j.neo.2014.07.010 | PACE4-based molecular targeting of prostate cancer using an engineered ⁶⁴Cu-radiolabeled peptide inhibitor | 下载 |
| 10.1021/acs.jmedchem.6b01499 | Positional Scanning Identifies the Molecular Determinants of a High Affinity Multi-Leucine Inhibitor for Furin and PACE4 | 下载 |
| 10.1006/abbi.1996.0249 | Purification and enzymatic characterization of recombinant prohormone convertase 2: stabilization of activity by 21 kDa 7B2 | 下载 |
| 10.1074/jbc.M107467200 | Inhibitory potency and specificity of subtilase-like pro-protein convertase (SPC) prodomains | 下载 |
| 10.1038/sj.jid.5701153 | Correlation between SPINK5 gene mutations and clinical manifestations in Netherton syndrome patients | 下载 |
| 10.7150/jca.16331 | Total PC Activity Is Increased in Uterine Lavage of Post-Menopausal Endometrial but Not Ovarian Cancer Patients | 下载 |
多肽Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-AMC的合成步骤：
1、合成CTC树脂：称取1.45g CTC Resin（如初始取代度约为0.95mmol/g）和1.65mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸（需要注意，此时CTC树脂体积会增大好几倍，避免DCM溶液过少），再加入4.13mmol DIPEA（Mw：129.1,d：0.740g/ml），反应2-3小时后，可不抽滤溶液，直接加入1ml的HPLC级甲醇，封端半小时。依次用DMF洗涤2次，甲醇洗涤1次，DCM洗涤一次，甲醇洗涤一次，DCM洗涤一次，DMF洗涤2次（这里使用甲醇和DCM交替洗涤，是为了更好地去除其他溶质，有利于后续反应）。得到 Fmoc-Arg(Pbf)-CTC Resin。结构图如下：
2、脱Fmoc：加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Arg(Pbf)-CTC Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：
3、缩合：取4.13mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入8.27mmol DIPEA，3.93mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：
4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到
H2N-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin
H2N-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin
以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin，结构如下：
5、焦谷氨酸反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入4.13mmol焦谷氨酸到树脂中，再加入8.27mmol DIPEA，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到Pyr-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin。 结构如下：
6、全保护切割：配置0.5%TFA/DCM溶液，溶液体积约为树脂体积的3倍。再次用DCM洗涤树脂2遍（去除残留DMF），后将配置好的溶液倒入到反应器中，反应30分钟。抽滤树脂，收集滤液（此时多肽已经从树脂上分离，存在于滤液中）。多肽序列为 Pyr-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-CTC Resin。 在滤液中添加DIEPA，调PH至7-8。用饱和NaHCO3洗涤滤液，分离出DCM层溶液。可适当旋蒸DCM层溶液，减少有机溶剂。再次加入1或2倍体积的乙酸乙酯，用稀HCl溶液调PH至微酸性，将多肽从DCM层萃取到乙酸乙酯层。用饱和NaCl洗涤2次乙酸乙酯层。用无水硫酸镁吸收乙酸乙酯层的水分。通过减压旋蒸，直接将乙酸乙酯完全旋蒸掉，得到晶体状固体多肽，用于下一步C端反应。或通过减压旋蒸保留适量乙酸乙酯的溶液体积，加入冰乙醚析出 多肽，然后对多肽进行烘干操作即可用于下一步C端反应。Pyr-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-COOH的结构图如下。
7、7-氨基-4-甲基香豆素反应连接：在上述树脂中，加入适当DMF后，再加入4.13mmol 7-氨基-4-甲基香豆素到树脂中，再加入8.27mmol DIPEA、3.93mmol HBTU，鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。 得到 Pyr-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-AMC。 结构如下：
8、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-AMC。结构图见产品结构图。
切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%
2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%
3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%
（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）
9、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
10、最后总结：
杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。
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