编号:401940
CAS号:
单字母:Palmiticacid-RSRNEKARHRAVR-NH2
编号: | 401940 |
中文名称: | PAL-Arg-Ser-Arg-Asn-Glu-Lys-Ala-Arg-His-Arg-Ala-Va |
单字母: | Palmiticacid-RSRNEKARHRAVR-NH2 |
三字母: | Palmiticacid 棕榈酸修饰 -Arg精氨酸 -Ser丝氨酸 -Arg精氨酸 -Asn天冬酰胺 -Glu谷氨酸 -Lys赖氨酸 -Ala丙氨酸 -Arg精氨酸 -His组氨酸 -Arg精氨酸 -Ala丙氨酸 -Val缬氨酸 -Arg精氨酸 -NH2C端酰胺化 |
氨基酸个数: | 13 |
分子式: | C81H149O18N33 |
平均分子量: | 1873.26 |
精确分子量: | 1872.18 |
等电点(PI): | 13.11 |
pH=7.0时的净电荷数: | 5.24 |
平均亲水性: | 1.4230769230769 |
疏水性值: | -2.28 |
消光系数: | - |
标签: | 烷基化肽 |
烷基化肽-说明
专肽生物可提供多肽烷基化修饰,增加多肽一端的疏水性,例如常见的C18,C16,C14,C12,以及C6等,也可根据客户要求,接其他长度的烷基化链。
多肽Palmiticacid-Arg-Ser-Arg-Asn-Glu-Lys-Ala-Arg-His-Arg-Ala-Val-Arg-NH2的合成步骤:
1、合成MBHA树脂:取若干克MBHA树脂(如初始取代度为0.5mmol/g)和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中,加入DMF,搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA,搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU,搅拌混合均匀。反应3-4小时后,用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次,甲醇洗涤2次,DCM洗涤2次,再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上,得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin},测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图:
2、脱Fmoc:取2.93g的上述树脂,用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:
3、缩合:取2.64mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入5.27mmol DIPEA,2.51mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:
4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到
H2N-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
H2N-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin
以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHA Resin,结构如下:
5、棕榈酸反应连接:在上述树脂中,加入适当DMF后,再加入2.64mmol 棕榈酸到树脂中,再加入5.27mmol DIPEA、2.51mmol HBTU,鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。 得到Palmiticacid-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Ala-Arg(Pbf)-His(Trt)-Arg(Pbf)-Ala-Val-Arg(Pbf)-Linker-MBHAResin。 结构如下:
5、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品Palmiticacid-Arg-Ser-Arg-Asn-Glu-Lys-Ala-Arg-His-Arg-Ala-Val-Arg-NH2。结构图见产品结构图。
切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)
6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结:
杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽等。
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