化学合成的多肽抗原是小分子, 本身很难具有好的抗原性,只能诱导动物产生很弱的免疫反应,因而与载体蛋白交联是很重要的。载体蛋白含有很多抗原决定基,能够刺激T-帮助细胞,进而诱导 B-细胞反应。用于与多肽交联的载体蛋白有多种,其中常用的是keyhole limpet hemacyanin (KLH), 牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA), 卵清蛋白(ovalbumin,OVA)和牛甲状腺球蛋白(bovine thyroglobulin,THY)。KLH具有更高的抗原性,是为常用的多肽交联载体。BSA也常用来作为多肽载体,但由于BSA经常被用做检测试验的阻断剂而使得该方法生产的抗体在应用上存在着一定的局限性。
多肽合成(化学)方法,包括液相和固相两种方法。液相多肽合成方法现在主要采用BOC和Z两种保护方法,现在主要应用在短肽合成,如阿斯巴甜,力肽,催产素等,其相对与固相多肽合成,具有保护基选择多,成本低廉,合成规模容易放大的许多优点。与固相多肽合成比较,液相多肽合成主要缺点是,合成范围小,一般都集中在10个氨基酸以内的多肽合成,还有合成中需要对中间体进行提纯,时间长,工作量大。固相多肽合成方法现在主要采用FMOC和BOC两种方法,它具有合成方便,迅速,容易实现自动化,而且可以比较容易的合成到30个氨基酸左右多肽。
(6)肽单元:参于肽键组成的6个原子(Cα1、C、O、N、H和Cα2)位于同一平面,Cα1和Cα2在平面上所处的位置为反式构型。此同一平面上的6个原子构成钛单元,其中,肽键的键长为0.132nm,介于C-N的单键长(0.149nm)和双链长(0.127nm)之间,所以有一定程度双链性能,不能自由旋转,而Cα分别与N和CO相连的键都是典型的单键,可以自由旋转,正是由于肽单元上Cα原子所连的两个单键可以自由旋转,决定了两个相邻肽单元平面的相对空间位置。
介绍了植物多肽信号的结构和分类,阐述了胞外非分泌型多肽、胞内非分泌型多肽和富含半胱氨酸的分泌型多肽结构特征及生物功能。重点讨论了植物多肽的酪氨酸硫酸化、脯氨酸羟基化和羟脯氨酸阿拉伯糖基化的翻译后修饰方式及蛋白质水解加工方式。并对不同种类翻译后修饰小肽结构和功能进行了概述。
⑴N端甲酰蛋氨酸或蛋氨酸的切除:N端甲酰蛋氨酸是多肽链合成的起始氨基酸,必须在多肽链折迭成一定的空间结构之前被切除。其过程是:① 去甲酰化;② 去蛋氨酰基。 ⑵氨基酸的修饰:由专一性的酶催化进行修饰,包括糖基化、羟基化、磷酸化、甲酰化等。 ⑶二硫键的形成:由专一性的氧化酶催化,将-SH氧化为-S-S-。
蛋白质发挥生物学功能主要是通过其结合表面的特定部位与其他小分子或生物大分子的相互结合。通过计算的方法预测蛋白质分子表面可能的结合位点,有利于基于蛋白质结构的计算机辅助药物设计,进而促进新药开发的进程。 根据蛋白质结合的配体不同,可以将蛋白质表面的结合位点分为蛋白质-蛋白质结合位点和蛋白质-配体结合位点。蛋白质结合位点的结构及氨基酸组成与其余表面都有明显的区别,这些区别主要表现在序列的保守性、氨基酸的极性、二级结构的组成以及形成的氢键等方面。这就为使用计算的方法预测蛋白质结合位点提供了可能。