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PKA Inhibitor Fragment (6-22) amide 是 cAMP 依赖性蛋白激酶 A (PKA) 的抑制剂，Ki 值为 2.8 nM。PKA Inhibitor Fragment (6-22) amide 可显着逆转小鼠低水平的吗啡镇痛感受性。

PKA Inhibitor Fragment (6-22) amide is an inhibitor of cAMP-dependent protein kinase A (PKA), with a Ki of 2.8 nM. PKA Inhibitor Fragment (6-22) amide can significantly reverse low-level morphine antinociceptive tolerance in mice.

PKA抑制剂片段（6-22）酰胺乙酸酯是cAMP依赖性蛋白激酶（PKA）（Ki=2.5nM）的合成肽抑制剂，来源于热稳定的PKA抑制剂蛋白PKI。它是最短的合成PKI肽，对PKA的抑制具有很高的效力。

PKA Inhibitor Fragment (6-22) amide acetate is a synthetic peptide inhibitor of cAMP-dependent protein kinase (PKA) (Ki = 2.5 nM), derived from the heat-stable PKA inhibitor protein PKI. It is the shortest synthetic PKI peptide that retains high potency for PKA inhibition.

Katz BM, et, al. Synthesis, characterization and inhibitory activities of (4-N3[3,5-3H]Phe10)PKI(6-22)amide and its precursors: photoaffinity labeling peptides for the active site of cyclic AMP-dependent protein kinase. Int J Pept Protein Res. 1989 Jun;33(6):439 : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/2550380/
Dalton GD, et, al. Alterations in brain Protein Kinase A activity and reversal of morphine tolerance by two fragments of native Protein Kinase A inhibitor peptide (PKI). Neuropharmacology. 2005 Apr; 48(5): 648-57. : https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15814100/

多肽H2N-Thr-Tyr-Ala-Asp-Phe-Ile-Ala-Ser-Gly-Arg-Thr-Gly-Arg-Arg-Asn-Ala-Ile-NH2的合成步骤：

1、合成MBHA树脂：取若干克的MBHA树脂（如初始取代度为0.5mmol/g）和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中，加入DMF，搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA，搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU，搅拌混合均匀。反应3-4小时后，用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次，甲醇洗涤2次，DCM洗涤2次，再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上，得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin}，测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图：

2、脱Fmoc：取2.67g的上述树脂，用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液，鼓氮气30分钟，然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。（此步骤脱除Fmoc基团，茚三酮检测为蓝色，Pip为哌啶）。结构图如下：

3、缩合：取2.4mmol Fmoc-Ile-OH 氨基酸，加入到上述树脂里，加适当DMF溶解氨基酸，再依次加入4.81mmol DIPEA，2.28mmol HBTU。反应30分钟后，取小样洗涤，茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。（洗涤树脂，去掉残留溶剂，为下一步反应做准备）。得到Fmoc-Ile-Linker-MBHA Resin。氨基酸：DIPEA：HBTU：树脂=3：6：2.85：1（摩尔比）。结构图如下：

4、依次循环步骤二、步骤三，依次得到

H2N-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Ala-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Ala-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Tyr(tBu)-Ala-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

H2N-Tyr(tBu)-Ala-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

Fmoc-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ala-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin

以上中间结构，均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中，一键画出。

最后再经过步骤二得到 H2N-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Ala-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Ala-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Asn(Trt)-Ala-Ile-Linker-MBHA Resin，结构如下：

5、切割：6倍树脂体积的切割液（或每1g树脂加8ml左右的切割液），摇床摇晃 2小时，过滤掉树脂，用冰无水乙醚沉淀滤液，并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次，最后将沉淀物放真空干燥釜中，常温干燥24小试，得到粗品H2N-Thr-Tyr-Ala-Asp-Phe-Ile-Ala-Ser-Gly-Arg-Thr-Gly-Arg-Arg-Asn-Ala-Ile-NH2。结构图见产品结构图。

切割液选择：1）TFA：H2O=95%：5%

2）TFA：H2O：TIS=95%：2.5%：2.5%

3）三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水=87.5%：5%：2.5%：2.5%：2.5%

（前两种适合没有容易氧化的氨基酸，例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。）

6、纯化冻干：使用液相色谱纯化，收集目标峰液体，进行冻干，获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

7、最后总结：

杭州专肽生物技术有限公司（ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com）主营定制多肽合成业务，提供各类长肽，短肽，环肽，提供各类修饰肽，如：荧光标记修饰（CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等），功能基团修饰肽（叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等），同位素标记肽（N15、C13），订书肽（Stapled Peptide）,脂肪酸修饰肽（Pal、Myr、Ste），磷酸化修饰肽（P-Ser、P-Thr、P-Tyr），环肽（酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环），生物素标记肽，PEG修饰肽，甲基化修饰肽等。

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