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Peptide Ac-AIK-AMC is a Research Peptide with significant interest within the field academic and medical research. Recent citations using Ac-AIK-AMC include the following: N-terminal domains of fibrillin 1 and fibrillin 2 direct the formation of homodimers: a possible first step in microfibril assembly TM Trask, TM Ritty, T Broekelmann - Biochemical , 1999 - portlandpress.comhttps://portlandpress.com/biochemj/article-abstract/340/3/693/35295 Interaction of tropoelastin with the amino-terminal domains of fibrillin-1 and fibrillin-2 suggests a role for the fibrillins in elastic fiber assembly TM Trask, BC Trask , TM Ritty, WR Abrams - Journal of Biological , 2000 - ASBMBhttps://www.jbc.org/article/S0021-9258(19)62184-8/abstract Annexin V inhibits protein kinase C activity via a mechanism of phospholipid sequestration T Dubois , JP MIRA, D Feliers , E Solito - Biochemical , 1998 - portlandpress.comhttps://portlandpress.com/biochemj/article-abstract/330/3/1277/34712 Studies on trypsin-modified bovine and human lens acylpeptide hydrolase R Senthilkumar, PN Reddy, KK Sharma - Experimental eye research, 2001 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014483500909552 Peptide computing-universality and complexity MS Balan , K Krithivasan - FL, USA, June 10-13, 2001 , 2002 - Springerhttps://link.springer.com/chapter/10.1007/3-540-48017-X_27 Regulation of non-responsiveness and death in cytotoxic T cells by the agonistic potency of MHC: Peptide ligands M Uhlin - 2006 - openarchive.ki.sehttps://openarchive.ki.se/xmlui/handle/10616/38864 Substrate specificity of the streptococcal cysteine protease M Nomizu, G Pietrzynski, T Kato, P Lachance - Journal of Biological , 2001 - ASBMBhttps://www.jbc.org/article/S0021-9258(19)82646-7/abstract FRET peptides reveal differential proteolytic activation in intraerythrocytic stages of the malaria parasites Plasmodium berghei and Plasmodium yoelii LN da Cruz, E Alves, MT Leal, MA Juliano - International journal for , 2011 - Elsevierhttps://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0020751910003784 Pyridinone derivatives as interesting formyl peptide receptor (FPR) agonists for the treatment of rheumatoid arthritis L Crocetti, C Vergelli, G Guerrini, MP Giovannoni - Molecules, 2021 - mdpi.comhttps://www.mdpi.com/1420-3049/26/21/6583 Expression, purification of recombinant cationic peptide AIK in Escherichia coli and its antitumor activity F Fan, H Sun, H Xu, J Liu, H Zhang, Y Li - Sheng wu Gong , 2015 - europepmc.orghttps://europepmc.org/article/med/27093838 In Silico And In Vitro Characterisation Of Peptide Binding Sequence Of Trim25 Cc Domain Towards 14-3-3 Sigma Protein C DE CHEN - 2023 - eprints.usm.myhttp://eprints.usm.my/60338/1/CHIANG%20DE%20CHEN%20-%20TESIS24.pdf Identification and Co-complex Structure of a New S. pyogenes SpeB Small Molecule Inhibitor AY Wang, GE GonzaÃ\x8cÂ\x81lez-PaÃ\x8cÂ\x81ez , DW Wolan - Biochemistry, 2015 - ACS Publicationshttps://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acs.biochem.5b00607 The Role of Dietary Peptides and the Gut Bacteria in Maintaining Intestinal and Homeostatic Balance AI Khan , Y Xin - Microbiological & Immunological Communications, 2023 - rootspress.orghttps://rootspress.org/journals/index.php/MIC/article/view/191

多肽AMC标记：定义、原理、应用及注意事项全解析

多肽AMC标记，全称多肽7-氨基-4-甲基香豆素标记（Peptide 7-Amino-4-Methylcoumarin Labeling），是一种将荧光分子“AMC”通过特异性共价键连接到多肽特定位点的修饰技术。其核心价值在于为多肽赋予可追踪、可定量的荧光特性，使其成为兼具生物活性与检测功能的“荧光探针”，广泛应用于生物医学科研、酶学分析及药物筛选等领域。

一、核心组件：AMC分子的核心特性

AMC（7-氨基-4-甲基香豆素）是该标记技术的核心荧光基团，其独特的化学与光学特性决定了标记效果，核心优势包括：

1. 光学性能稳定：激发波长约340-360 nm，发射波长约440-460 nm，荧光量子产率高，光漂白抗性强，且背景荧光低，能有效提升检测灵敏度；

2. 反应活性适配：AMC常以“活性酯衍生物”形式（如AMC-NHS酯、AMC-COOH）存在，可与多肽分子末端（N端/C端）或侧链（如赖氨酸的ε-氨基、天冬氨酸/谷氨酸的羧基）发生酰胺化反应，形成稳定的共价键，且对多肽的空间结构破坏极小；

3. 水溶性适配：AMC分子兼具一定的亲水性与疏水性，标记后不会显著改变多肽的溶解特性，适配后续水性体系的生物实验。

二、标记原理与核心流程

多肽AMC标记的核心是“特异性共价偶联”，需在温和条件下进行以保障多肽生物活性，典型流程如下：

1. 多肽预处理：先通过高效液相色谱（HPLC）等技术纯化目标多肽，去除杂质；同时确认多肽的活性位点（如受体结合位点、酶切位点），避开这些位点选择标记位点（常用N端氨基或C端羧基）；

2. AMC活性酯制备：将AMC与活化试剂（如NHS、DCC）反应，生成高活性的AMC-NHS酯（减少AMC自身聚合，提升与多肽的反应效率）；

3. 偶联反应：在缓冲体系（如PBS缓冲液，pH 7.0-8.0）中混合多肽与AMC活性酯，控制反应温度（25℃或4℃）与时间（2-4小时），让AMC活性酯的活性基团与多肽的氨基/羧基发生酰胺化反应，形成稳定的标记产物；

4. 纯化与验证：通过HPLC分离未反应的游离AMC、活化试剂及副产物，收集高纯度的AMC标记多肽；再通过质谱（确认分子量是否符合标记后理论值）、荧光光谱（验证荧光信号强度）进行质控，确保标记成功且多肽活性未受影响。

三、核心应用场景

AMC标记的核心优势的是“标记后多肽保留生物活性，荧光信号可实时定量检测”，因此主要应用于以下场景：

1. 蛋白酶活性检测（最核心应用）：将AMC标记在多肽底物的蛋白酶特异性识别序列末端，当蛋白酶切割多肽时，AMC基团被释放（游离AMC的荧光强度远高于结合态），通过检测荧光强度的变化速率，可定量分析蛋白酶的活性（如基质金属蛋白酶MMPs、胰蛋白酶、 caspases等的活性检测）；

2. 受体-配体结合分析：用AMC标记多肽配体，与细胞表面或纯化的受体孵育后，通过荧光成像可追踪配体与受体的结合过程，通过荧光强度定量结合亲和力（Kd值）；

3. 药物筛选：针对特定蛋白酶或受体的药物候选分子，以AMC标记多肽为探针，通过荧光信号的变化（如酶活性被抑制时荧光释放减少），高通量筛选药物的抑制/激活活性，评估药物 potency；

4. 多肽体内/体外追踪：AMC标记的多肽进入细胞或生物体内后，可通过荧光显微镜、小动物活体成像系统等设备，实时观察多肽的分布、转运及代谢过程，为多肽药物的药代动力学研究提供支撑。

四、关键注意事项

1. 标记位点选择：必须避开多肽的生物活性中心（如酶切位点、受体结合位点），否则会导致多肽失去原有功能；若多肽含多个氨基/羧基，可通过控制反应摩尔比、pH值实现特异性单点标记；

2. 反应条件控制：缓冲液pH需严格控制在7.0-8.0（过酸会抑制酰胺化反应，过碱会导致AMC活性酯水解失效）；低温反应（4℃）可减少多肽降解，适合不稳定多肽的标记；

3. 杂质去除：游离AMC会导致背景荧光偏高，影响检测准确性，因此标记后需通过HPLC彻底纯化，确保标记多肽纯度≥95%（科研级）或≥98%（药物研发级）；

4. 多肽稳定性保护：若多肽含半胱氨酸（Cys），需在反应体系中添加少量还原剂（如DTT），避免Cys侧链巯基氧化形成二硫键，影响多肽结构与标记效率；

5. 荧光检测条件匹配：检测时需根据AMC的光学特性调整激发/发射波长，避免与实验体系中其他荧光物质（如细胞自身荧光、染料）的光谱重叠，减少干扰。

五、AMC与AFC标记的核心区别（补充说明）

此前你关注过多肽AFC标记，两者核心差异在于荧光基团的结构与性能，具体对比如下：AMC含“甲基（-CH₃）”，AFC含“三氟甲基（-CF₃）”；AFC的背景荧光更低、光稳定性更强，但合成成本更高；AMC性价比更高，荧光信号强度足够满足多数科研需求，是更常用的基础荧光标记基团。