编号: | 200223 |
中文名称: | 黄体生成素释放激素(D-Trp⁶)-LHRH (free acid) |
英文名: | (D-Trp⁶)-LHRH (free acid) |
CAS号: | 129418-54-8 |
单字母: | Pyr-HWSYwLRPG-OH |
三字母: | Pyr 焦谷氨酸 -His组氨酸 -Trp色氨酸 -Ser丝氨酸 -Tyr酪氨酸 -DTrpD型色氨酸 -Leu亮氨酸 -Arg精氨酸 -Pro脯氨酸 -Gly甘氨酸 -OHC端羧基 |
氨基酸个数: | 9 |
分子式: | C64H81N17O14 |
平均分子量: | 1312.43 |
精确分子量: | 1311.61 |
等电点(PI): | - |
pH=7.0时的净电荷数: | 2.24 |
平均亲水性: | -1.3142857142857 |
疏水性值: | -1.04 |
消光系数: | 12490 |
来源: | 人工化学合成,仅限科学研究使用,不得用于人体。 |
储存条件: | 负80℃至负20℃ |
标签: | D型氨基酸肽 垂体和下丘脑激素 |
很多蛋白在细胞中非常容易被降解,或被标记,进而被选择性地破坏。但含有部分D型氨基酸的多肽则显示了很强的抵抗蛋白酶降解能力。
DOI | 名称 | |
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10.1530/eje.0.1510141 | Antiproliferative effects of the GnRH antagonist cetrorelix and of GnRH-II on human endometrial and ovarian cancer cells are not mediated through the GnRH type I receptor | 下载 |
10.1158/0008-5472.CAN-06-3222 | Gonadotropin-releasing hormone type II antagonists induce apoptotic cell death in human endometrial and ovarian cancer cells in vitro and in vivo | 下载 |
10.1021/bc500081g | GnRH-Gemcitabine conjugates for the treatment of androgen-independent prostate cancer: pharmacokinetic enhancements combined with targeted drug delivery | 下载 |
10.1136/bmj.291.6506.1387 | Importance of early tumour exacerbation in patients treated with long acting analogues of gonadotrophin releasing hormone for advanced prostatic cancer | 下载 |
10.1016/0196-9781(85)90333-x | Effects of in vivo pretreatment with D-Trp-6-LH-RH on prolactin and LH secretion by pituitary glands in vitro | 下载 |
10.1016/0167-0115(86)90216-8 | Radioimmunoassay of [D-Trp6]-luteinizing hormone-releasing hormone: its application to animal pharmacokinetic studies after single injection and long-acting formulation administration | 下载 |
10.1073/pnas.82.5.1547 | Radioimmunoassay for 6-D-tryptophan analog of luteinizing hormone-releasing hormone: measurement of serum levels after administration of long-acting microcapsule formulations | 下载 |
10.1073/pnas.82.8.2498 | Combination of long-acting microcapsules of the D-tryptophan-6 analog of luteinizing hormone-releasing hormone with chemotherapy: investigation in the rat prostate cancer model | 下载 |
10.1210/endo-116-6-2227 | D-Trp-6-luteinizing hormone-releasing hormone inhibits hyperprolactinemia in female rats | 下载 |
多肽Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-DTrp-Leu-Arg-Pro-Gly-COOH的合成步骤:
1、合成CTC树脂:称取1.66g CTC Resin(如初始取代度约为1.19mmol/g)和2.37mmol Fmoc-Gly-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入5.93mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到 Fmoc-Gly-CTC Resin。结构图如下:
2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Gly-CTC Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:
3、缩合:取5.93mmol Fmoc-Pro-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入11.85mmol DIPEA,5.63mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Pro-Gly-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:
4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到
H2N-Pro-Gly-CTC Resin
Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
H2N-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
H2N-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
Fmoc-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
H2N-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
Fmoc-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
H2N-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
Fmoc-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
H2N-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
Fmoc-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
H2N-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
Fmoc-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin
以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。
最后再经过步骤二得到 H2N-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTC Resin,结构如下:
5、焦谷氨酸反应连接:在上述树脂中,加入适当DMF后,再加入5.93mmol 焦谷氨酸到树脂中,再加入11.85mmol DIPEA、5.63mmol HBTU,鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。 得到Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-DTrp(Boc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-Gly-CTCResin。 结构如下:
6、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-DTrp-Leu-Arg-Pro-Gly-COOH。结构图见产品结构图。
切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%
(前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)
6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。
7、最后总结:
杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽
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