浙江省科技型企业---加速您的多肽研究
首页 >多肽产品 >三肽FITC-Acp-Ala-Lys

多肽产品

三肽FITC-Acp-Ala-Lys,5FITC-Ahx-Ala-Lys-COOH,5FITC-Acp-AK-OH,杭州专肽生物的产品

三肽FITC-Acp-Ala-Lys

编号:201528

CAS号:

单字母:5FITC-Ahx-AK-OH

纠错
  • 编号:201528
    中文名称:三肽FITC-Acp-Ala-Lys
    单字母:5FITC-Ahx-AK-OH
    三字母:5FITC

    N端FITC标记

    -Ahx

    6-氨基己酸(Linker)

    -Ala

    丙氨酸

    -Lys

    赖氨酸

    -OH

    C端羧基

    氨基酸个数:3
    分子式:C36H41N5O9S1
    平均分子量:719.8
    精确分子量:719.26
    等电点(PI):-
    pH=7.0时的净电荷数:1
    平均亲水性:1.25
    疏水性值:-1.05
    消光系数:-
    来源:人工化学合成,仅限科学研究使用,不得用于人体。
    储存条件:负80℃至负20℃
    标签:氨基酸衍生物肽    FAM、FITC修饰肽    三肽   

  • 多肽荧光标记由于没有放射性,实验操作简单。因此,目前在生物学研究中多肽荧光标记应用非常广泛,多肽荧光标记方法与荧光试剂的结构有关系,对于有游离羧基的采用的方法与接多肽反应相同,也采用HBTU/HOBt/DIEA方法连接。 在N端标记FITC的多肽需经历环化作用来形成荧光素,通常会伴有最后一个氨基酸的去除,但当有一个间隔器如氨基己酸,或者是通过非酸性环境将目的多肽从树脂上切下来时,这种情况可避免在切割的过程中被TFA切割掉。
            人们利用利用荧光标记的多肽来检测目标蛋白的活性,并将 其发展的高通量活性筛选方法应用于疾病治疗靶点蛋白的药物筛选和药物开发(例如,各种激 酶、磷酸酶、肽酶等)。
            专肽生物能够提供技术成熟的各种荧光标记多肽。
     

     

    下面是一些常见的多肽修饰荧光物质结构:




    FITC标记
     

     

          FITC(异硫氰酸荧光素)具有比较高的活性,我们公司可以通过两种方式将FITC标记于多肽 上:(1) 将FITC标记于赖氨酸(Lys)或被选择性地脱保护的鸟氨酸(ornithine)侧链氨基 上;(2) 将FITC标记于多肽N端氨基。

     

          当在N端标记时,建议在最后一个氨基和由异硫氰酸酯与氨基反应产生的硫脲键之间引入 烷基间隔器(alkyl spacer),如氨基己酸(Ahx)。链接切割需要酸性环境,在N端标记FITC 的多肽需经历环化作用来形成荧光素,通常会伴有最后一个氨基酸的去除,但当有一个间隔器 如氨基己酸,或者是通过非酸性环境将目的肽从树脂上切下来时,这种情况可避免。空间位阻 被认为是在荧光染料前使用Ahx的主要原因,而不是为什么FITC不能直接偶联在多肽上的原因。

     

          Ahx或b-Ala均可作为间隔器用于FITC标记的多肽上。

     

     

     



     

    普通荧光修饰

     

    荧光修饰中文名称 N端 N端带有linker
    生物素标记多肽 Biotin- Biotin-Ahx-
    异硫氰酸荧光素 FITC-   FITC-Ahx-  
    5-羧基荧光素 5-FAM- 5-FAM-Ahx- 
    丹磺酰荧光素 Dansyl- Dansyl-Ahx- 
    5-羧基四甲基罗丹明 TMR-  (TAMRA-) TMR-Ahx-  (TAMRA-Ahx-) 

    通过Lys侧链氨基连接的荧光修饰

     

    多肽N端 多肽序列中间 N端带有linker
    生物素标记多肽 Biotin- 多肽C端
    Lys(Biotin)-  -Lys(Biotin)-- -Lys(Biotin) 
    Lys(FITC)- -Lys(FITC)-  -Lys(FITC)
    Lys(5-FAM)- -Lys(5-FAM)- -Lys(5-FAM)
    Lys(Dansyl)-  -Lys(Dansyl)- -Lys(Dansyl)
    Lys(TMR)- -Lys(TMR)-  -Lys(TMR)
    Lys(Dnp)- -Lys(Dnp)-  -Lys(Dnp)



    专肽常做的荧光物质的激发光波长和发射光波长。可供参考选择:
     

    荧光基团 Ex(nm) Em(nm) 荧光基团 Ex(nm) Em(nm)
    羟基香豆素 325 386 R-phycoerythrin (PE) (489) 565 578
    丹磺酰氯 340 578 Rhodamine Red-X 560 580
    AMC 345 445 Tamara 565 580
    甲氧基香豆素 360 410 Alexa fluor 555 556 573
    Alexa fluor 系列 345 442 Alexa fluor 546 556 573
    氨基香豆素 350 445 Rox 575 602
    Dabcyl 453 - Alexa fluor 568 578 603
    Cy2 490 510 Texas Red 589 615
    FAM 495 517 Alexa fluor 594 590 617
    Alexa fluor 488 494 517 Alexa fluor 621 639
    FITC 495 519 Alexa fluor 633 650 668
    Alexa fluor 430 430 545 Cy5 (625) 650 670
    5-FAM 492 518 Alexa fluor 660 663 690
    Alexa fluor 532 530 530 Cy5.5 675 694
    HEX 535 556 TruRed 490; 675 695
    5-TAMRA 542 568 Alexa fluor 680 679 702
    Cy3 550 570 Cy7 743 767
    TRITC 547 572 Cy3.5 581 596

  • 多肽5FITC-Ahx-Ala-Lys-COOH的合成步骤:

    1、合成CTC树脂:称取0.64g CTC Resin(如初始取代度约为1.16mmol/g)和0.89mmol Fmoc-Lys(Boc)-OH于反应器中,加入适量DCM溶解氨基酸(需要注意,此时CTC树脂体积会增大好几倍,避免DCM溶液过少),再加入2.23mmol DIPEA(Mw:129.1,d:0.740g/ml),反应2-3小时后,可不抽滤溶液,直接加入1ml的HPLC级甲醇,封端半小时。依次用DMF洗涤2次,甲醇洗涤1次,DCM洗涤一次,甲醇洗涤一次,DCM洗涤一次,DMF洗涤2次(这里使用甲醇和DCM交替洗涤,是为了更好地去除其他溶质,有利于后续反应)。得到  Fmoc-Lys(Boc)-CTC Resin。结构图如下:

     

    2、脱Fmoc:加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Lys(Boc)-CTC Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:

     

    3、缩合:取2.23mmol Fmoc-Ala-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入4.45mmol DIPEA,2.12mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Ala-Lys(Boc)-CTC Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:

     

    4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到

    H2N-Ala-Lys(Boc)-CTC Resin

    Fmoc-Ahx-Ala-Lys(Boc)-CTC Resin

    以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。

    最后再经过步骤二得到 H2N-Ahx-Ala-Lys(Boc)-CTC Resin,结构如下:

    5、异硫氰酸荧光素酯 FITC反应连接:在上述树脂中,加入适当DMF后,再加入2.23mmol异硫氰酸荧光素酯 FITC到树脂中,再加入4.45mmol DIPEA,鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。 得到5FITC-Ahx-Ala-Lys(Boc)-CTCResin。 结构如下:

    6、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品5FITC-Ahx-Ala-Lys-COOH。结构图见产品结构图。

    切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%

    2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%

    3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%

    (前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)

    6、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

    7、最后总结:

    杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽

    以上所有内容,为专肽生物原创内容,请勿发布到其他网站上。

  • 暂时没有数据