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Ac-Arg-Cys-Met-Ava-Arg-Val-Tyr-Ava-Cys-NH2,Ac-Arg-Cys-Met-Ava-Arg-Val-Tyr-Ava-Cys-NH2,Ac-RCM-Ava-RVY-Ava-C-NH2,杭州专肽生物的产品

Ac-Arg-Cys-Met-5-aminopentanoyl-Arg-Val-Tyr-5-aminopentanoyl-Cys-NH2, (Disulfide bond)

Ac-Arg-Cys-Met-5-aminopentanoyl-Arg-Val-Tyr-5-aminopentanoyl-Cys-NH2是一种完全竞争性MCH-1受体拮抗剂,即使在微摩尔浓度(Kb=3.6nM)下也对人MCH-1接收器没有激动剂作用。

编号:413328

CAS号:353487-64-6

单字母:Ac-RCM-Ava-RVY-Ava-C-NH2(Disulfide Bridge:C2-C9)

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  • 编号:413328
    中文名称:Ac-Arg-Cys-Met-5-aminopentanoyl-Arg-Val-Tyr-5-aminopentanoyl-Cys-NH2, (Disulfide bond)
    英文名:Ac-Arg-Cys-Met-5-aminopentanoyl-Arg-Val-Tyr-5-aminopentanoyl-Cys-NH2, (Disulfide bond)
    CAS号:353487-64-6
    单字母:Ac-RCM-Ava-RVY-Ava-C-NH2(Disulfide Bridge:C2-C9)
    三字母:Ac-Arg-Cys-Met-Ava-Arg-Val-Tyr-Ava-Cys-NH2(Disulfide Bridge:Cys2-Cys9)
    氨基酸个数:9
    分子式:C49H82O11N16S3
    平均分子量:1167.47
    精确分子量:1166.55
    等电点(PI):-
    pH=7.0时的净电荷数:4.94
    平均亲水性:-0.31428571428571
    疏水性值:0.17
    消光系数:1490
    标签:二硫键环肽    氨基酸衍生物肽    拮抗剂相关肽(Antagonist Peptide)   

  • Ac-Arg-Cys-Met-5-aminopentanoyl-Arg-Val-Tyr-5-aminopentanoyl-Cys-NH2是一种完全竞争性MCH-1受体拮抗剂,即使在微摩尔浓度(Kb=3.6nM)下也对人MCH-1接收器没有激动剂作用。

    Ac-Arg-Cys-Met-5-aminopentanoyl-Arg-Val-Tyr-5-aminopentanoyl-Cys-NH2 is a full competitive MCH-1 receptor antagonist and has no agonist effect on human MCH-1 receptor even at micromolar concentrations (Kb = 3.6 nM).

    二硫键广泛存在与蛋白结构中,对稳定蛋白结构具有非常重要的意义,二硫键一般是通过序列中的2个Cys的巯基,经氧化形成。
     

    形成二硫键的方法很多:空气氧化法,DMSO氧化法,过氧化氢氧化法等。
     

    二硫键的合成过程,  可以通过Ellman检测以及HPLC检测方法对其反应进程进行监测。  
       

    如果多肽中只含有1对Cys,那二硫键的形成是简单的。多肽经固相或液相合成,然后在pH8-9的溶液中进行氧化。      
     

    当需要形成2对或2对以上的二硫键时,合成过程则相对复杂。尽管二硫键的形成通常是在合成方案的最后阶段完成,但有时引入预先形成的二硫化物是有利于连合或延长肽链的。通常采用的巯基保护基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。我们分别列出两种以2-Cl树脂和Rink树脂为载体合成的多肽上多对二硫键形成路线:
     

    二硫键反应条件选择    
     

     二硫键即为蛋白质或多肽分子中两个不同位点Cys的巯基(-SH)被氧化形成的S-S共价键。 一条肽链上不同位置的氨基酸之间形成的二硫键,可以将肽链折叠成特定的空间结构。多肽分 子通常分子量较大,空间结构复杂,结构中形成二硫键时要求两个半胱氨酸在空间距离上接近。 此外,多肽结构中还原态的巯基化学性质活泼,容易发生其他的副反应,而且肽链上其他侧链 也可能会发生一系列修饰,因此,肽链进行修饰所选取的氧化剂和氧化条件是反应的关键因素, 反应机理也比较复杂,既可能是自由基反应,也可能是离子反应。      

    反应条件有多种选择,比如空气氧化,DMSO氧化等温和的氧化过程,也可以采用H2O2,I2, 汞盐等激烈的反应条件。
     

    空气氧化法: 空气氧化法形成二硫键是多肽合成中最经典的方法,通常是将巯基处于还原态的多肽溶于水中,在近中性或弱碱性条件下(PH值6.5-10),反应24小时以上。为了降低分子之间二硫键形成的可能,该方法通常需要在低浓度条件下进行。
     

    碘氧化法:将多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中,逐滴滴加10-15mol/L的碘进行氧化,反应15-40min。当肽链中含有对碘比较敏感的Tyr、Trp、Met和His的残基时,氧化条件要控制的更精确,氧化完后,立即加入维生素C或硫代硫酸钠除去过量的碘。 当序列中有两对或多对二硫键需要成环时,通常有两种情况:
     

    自然随机成环:       序列中的Cys之间随机成环,与一对二硫键成环条件相似;
     

    定点成环:       定点成环即序列中的Cys按照设计要求形成二硫键,反应过程相对复杂。在 固相合成多肽之前,需要提前设计几对二硫键形成的顺序和方法路线,选择不同的侧链 巯基保护基,利用其性质差异,分步氧化形成两对或多对二硫键。       通常采用的巯基保护 基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob等多种基团。

  • 多肽Ac-Arg-Cys-Met-Ava-Arg-Val-Tyr-Ava-Cys-NH2的合成步骤:

    1、合成MBHA树脂:取若干克MBHA树脂(如初始取代度为0.5mmol/g)和1倍树脂摩尔量的Fmoc-Linker-OH加入到反应器中,加入DMF,搅拌使氨基酸完全溶解。再加入树脂2倍量的DIEPA,搅拌混合均匀。再加入树脂0.95倍量的HBTU,搅拌混合均匀。反应3-4小时后,用DMF洗涤3次。用2倍树脂体积的10%乙酸酐/DMF 进行封端30分钟。然后再用DMF洗涤3次,甲醇洗涤2次,DCM洗涤2次,再用甲醇洗涤2次。真空干燥12小时以上,得到干燥的树脂{Fmoc-Linker-MHBA Resin},测定取代度。这里测得取代度为 0.3mmol/g。结构如下图:

    2、脱Fmoc:取1.03g的上述树脂,用DCM或DMF溶胀20分钟。用DMF洗涤2遍。加3倍树脂体积的20%Pip/DMF溶液,鼓氮气30分钟,然后2倍树脂体积的DMF 洗涤5次。得到 H2N-Linker-MBHA Resin 。(此步骤脱除Fmoc基团,茚三酮检测为蓝色,Pip为哌啶)。结构图如下:

    3、缩合:取0.93mmol Fmoc-Cys(Trt)-OH 氨基酸,加入到上述树脂里,加适当DMF溶解氨基酸,再依次加入1.85mmol DIPEA,0.88mmol HBTU。反应30分钟后,取小样洗涤,茚三酮检测为无色。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂。(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。得到Fmoc-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin。氨基酸:DIPEA:HBTU:树脂=3:6:2.85:1(摩尔比)。结构图如下:

    4、依次循环步骤二、步骤三,依次得到

    H2N-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    H2N-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    H2N-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    H2N-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    H2N-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    H2N-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Met-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    H2N-Met-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Cys(Trt)-Met-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    H2N-Cys(Trt)-Met-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    Fmoc-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-Met-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin

    以上中间结构,均可在专肽生物多肽计算器-多肽结构计算器中,一键画出。

    最后再经过步骤二得到 H2N-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-Met-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHA Resin,结构如下:

    5、乙酸酐反应连接:在上述树脂中,加入适当DMF后,再加入0.93mmol乙酸酐到树脂中,再加入1.85mmol DIPEA,鼓氮气反应30分钟。用2倍树脂体积的DMF 洗涤3次树脂(洗涤树脂,去掉残留溶剂,为下一步反应做准备)。 得到Ac-Arg(Pbf)-Cys(Trt)-Met-Ava-Arg(Pbf)-Val-Tyr(tBu)-Ava-Cys(Trt)-Linker-MBHAResin。 结构如下:

     

    6、切割:6倍树脂体积的切割液(或每1g树脂加8ml左右的切割液),摇床摇晃 2小时,过滤掉树脂,用冰无水乙醚沉淀滤液,并用冰无水乙醚洗涤沉淀物3次,最后将沉淀物放真空干燥釜中,常温干燥24小试,得到粗品Ac-Arg-Cys-Met-Ava-Arg-Val-Tyr-Ava-Cys-NH2。结构图见产品结构图。

    切割液选择:1)TFA:H2O=95%:5%

    2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%

    3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5%:5%:2.5%:2.5%:2.5%

    (前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种适合几乎所有的序列。)

    7、纯化冻干:使用液相色谱纯化,收集目标峰液体,进行冻干,获得蓬松的粉末状固体多肽。不过这时要取小样复测下纯度 是否目标纯度。

    8、最后总结:

    杭州专肽生物技术有限公司(ALLPEPTIDE https://www.allpeptide.com)主营定制多肽合成业务,提供各类长肽,短肽,环肽,提供各类修饰肽,如:荧光标记修饰(CY3、CY5、CY5.5、CY7、FAM、FITC、Rhodamine B、TAMRA等),功能基团修饰肽(叠氮、炔基、DBCO、DOTA、NOTA等),同位素标记肽(N15、C13),订书肽(Stapled Peptide),脂肪酸修饰肽(Pal、Myr、Ste),磷酸化修饰肽(P-Ser、P-Thr、P-Tyr),环肽(酰胺键环肽、一对或者多对二硫键环),生物素标记肽,PEG修饰肽,甲基化修饰肽

    以上所有内容,为专肽生物原创内容,请勿发布到其他网站上。

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